柑橘转chit42和phyB基因的研究

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柑橘是世界第一大水果,长期以来,常规育种手段受到珠心胚干扰、性器官败育、育种周期长以及遗传上高度杂合等因素的影响,进程缓慢。近年来,不断完善的转基因技术为我们提供了一条快速直接品种改良的途径。本研究以枳的实生苗上胚轴为外植体,利用根癌农杆菌介导法转化phyB基因。成年态材料的转化可以有效地解决遗传育种童期漫长的难题。本研究以chit42基因为目标基因,以柑橘成年态节间茎段为外植体,研究了其再生和转化体系。主要研究结果如下:1.优化了柑橘实生态上胚轴再生和转化体系,确定了MS附加1mg/L6-BA的培养基适合于枳壳的萌发;25天苗龄的外植体转化再生频率最高;筛选抗性芽的适宜卡那霉素浓度为75mg/L。试验共得到了27棵试管苗,经PCR检测证实,其中5棵外源基因phyB和nptⅡ均有特异带扩增。2.研究了成年态节间茎段的再生转化体系,以切割成1cm长的材料,经过改良的消毒方法,灭菌效果最佳;以MS附加3mg/L的BA作为纽荷尔和冰糖橙不定芽的诱导培养基再生率最高;以MS附加1mg/LBA,0.5mg/L NAA作为椪柑不定芽的诱导培养基再生率最高。初期选择培养以卡那霉素的选择压浓度为30mg/L,后期再转入卡那霉素50mg/L的选择压下继续筛选。3.通过茎尖嫁接来快速获得再生植株。纽荷尔、冰糖橙和桠柑均获得了转化抗性芽,纽荷尔的抗性芽通过嫁接,得到了三棵试管苗,经过过PCR检测证实,其中一棵外源基因nptⅡ有特异带扩增。
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