前言 碱性成纤维细胞因子(Basic fibroblast growth factor，BFGF)是一种有效的神经营养性和血管活性多肽。本研究的目的是研究短暂MCAO诱导局灶脑缺血后BFGF在不同时间的表达及细胞分布情况。局灶性脑缺血后应用BFGF，评价BFGF对NO的影响，以探讨BFGF对缺血脑组织的保护作用。 材料与方法 一、动物来源及分组 健康Wistar大鼠，共55只，雄性，体重280±30克。随机分组1、对照组：正常对照组n=5。2、实验组：(1)缺血组：1-6组，动物缺血120分再灌注6小时为1组；再灌注12小时为2组；再灌注24小时为3组；再灌注3天为4组；再灌注4天为5组，再灌注7天为6组。每组n=5。(2)缺血治疗组：(BFGF100μg／kg溶于生理盐水中腹腔注射，缺血后即刻给药)，再灌注6小时为1组，再灌注12小时为2组，再灌注24小时为3组，再灌注72小时为4组。每组n=5。以缺血组作为对照组(腹腔内注射生理盐水)。 二、大鼠短暂脑缺血动物模型建立 腹腔注射10％水合氯醛3.5ml／kg体重麻醉，动物仰卧位固定于手术台上，颈正中切开，手术显微镜下分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA)，热凝并切断ECA两分支枕动脉，甲状腺上动脉，结扎并游离ECA主干一段，沿ICA分离ICA的颈外分支翼腭动脉(PPA)，穿线沿其起点结扎，ECA近端备线，用动脉夹暂时阻断CCA及ICA，轻轻向下牵拉ECA残端，在ECA剪一小口，将制备好的直径 0．Zmrn，头端 0．smm的尼龙线插人ECA，扎紧备线，放开动脉夹，轻轻推进尼龙线，经CCA分叉处通过 ICA人颅至大脑前动脉（ACAX阻断右侧大脑中动脉（MCA）所有血液来源，尼龙线插人深动距分又为 18．5。0．snun，缝合皮肤，外留 Icm长尼龙线头。缺血时间为 2 ／J’时，再灌注时轻轻提拉所留线头，至到阴力时提示尼龙线至颈外动脉残端。如动物已清醒，需再掀醉后再灌注。 三、免疫组化染色。取相邻切片分别进行兔多抗染色。具体步骤： ＊用二甲苯及乙醇处理标本脱石蜡。 2／％过氧化氢孵育5分钟，消除内源性过氧化酶活性。 3、蒸馏水冲洗，0．m 洗 3次，每次 3－5分钟。 4、封闭用正常羊血清工作液温孵育10分钟。 5、滴加BFGF兔多抗，4℃过夜。 6＼0．of MPBS洗 3次，每次 3－5分钟。 7、滴加生物素标记的第二抗体，37℃孵育30分钟。 8、0．01MPBS洗 3次，每次3－5分钟。 9、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素，37t孵育30分。 10、0．01测S洗 3次，每次 3－5分钟。 11．滴加新鲜配制的 DAB液，观察显色情况。 12、自来水冲洗中止反应。 13、苏木素复染，梯度洒精脱水，二甲苯透明中性树胶封片。 14、阴性对照：以0．01MPBC置换一抗。 四＊O测定 所有标本均于灌注固定前取心脏血 4rnl，4小时内予 2．oml乃mm＊LZnS 0山摇匀后，30皿yWu离心10Mn，储血浆，特于试管中一20T保存备检。NO测定采用钟点法。 ·二· 结 果 一、免疫组化结果： 1、在阴性对照组中发现BFGF免疫阳性细胞。 2、BFGF在神经元和胶质细胞中有BFGF免疫阳性细胞表达。 3、BFGF免疫阳性表达的细胞数与对照组比较，无论是梗塞区还是梗塞周围区，无论神经元还是神经胶质细胞，在缺血雕注6小时J2小时＊天＊天八天均有显著增加，二天时达高峰，3天时开始下降月天时只有少量表达，在缺血对侧没有BFGF表达。 4、缺血周围区BFGF免疫阳性细胞高于梗塞区。 5、在软脑膜、室管膜细胞及脉络丛有BFGF免疫阳性细胞表达。 二JO测定结果： 用药组与对照组比较，再灌注2小时，24小时，3天各时点NO水平明显降低。用药后该组NO随缺血再灌注过程的发展JO缓慢升高。 讨 论 BF‘GF是一种有效的神经营养和血管活性多肽，可以减轻局灶缺血后大脑损伤程度。本研究提示在短暂 MCAO后，早期 BF－GF表达上调，神经元和非神经元均有表达，这一结果与Iwata报导相同。 本研究发现BFGF在梗塞周围皮层，在梗塞周、围白质均有表达。BFGF免疫阳性细胞在梗塞周围区表达高于缺血中心区。BFGF可能通过促进脑组织中多种神经元存活，并具有促进轴突 ·3·生长作用，对抗路性氨基酸及多种神经毒性物质所造成的神经元损害。因BFGF在脑组织含量高，靶细胞广，神经营养作用活性强，故BFGF可能参与缺血性脑损伤后神经元保护及修复作用。本研究发现 MCAO后 BFGF表达上调，且 BFGF免疫阳性细胞在梗塞周围区表达高于缺血中心区。提示BFGF表达的增加，对促进缺血周围区的损伤修复有重要作用。是脑组织抵抗缺血＼缺氧的一种生理性反应，从而保护神经元。 本研究提示在短暂缺血后BFGF的表达时间依赖性，6小时开始表达，12小时表达增加，二天时达高峰，3天时表达下降，7天仅有少量表达。梗塞发生后损伤组织释放内源性 BFGF，