论文部分内容阅读
目的：类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一病因未明的系统性疾病，特点是慢性、多关节炎症，最后导致软骨和骨的破坏。其主要病理特点是滑膜细胞增生、衬里层增厚、多种炎性细胞浸润、血管翳形成，以及软骨和骨组织的破坏。近年来的研究表明，RA的软骨破坏与细胞因子网络失调及软骨基质的降解有密切的关系。目前主要的治疗方法为早期应用免疫抑制剂来抑制关节的骨破坏,控制病情发展。临床上应用灯盏花素治疗RA取得了较好的疗效。本文旨在成功建立佐剂性关节炎（Adjuvant Arthritis，AA）模型的基础上观察灯盏花素对大鼠关节炎的治疗效果，并检测其对模型鼠血清白介素-1（interleukin-1，IL-1）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α、TNF-α）水平及滑膜基质金属蛋白酶3（ Matrix metalloproteinase 3,MMP3）和组织金属蛋白酶抑制物1(Tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1)表达的影响，探讨作用机制。方法：(1)选取50只Wistar雄性大鼠，随机分为五组：正常组、模型组、灯盏花素组、来氟米特组、配伍组。除正常对照组，每组大鼠右足皮内注射弗氏完全佐剂0.1ml制作关节炎模型。(2)在造模后第18天，除模型组外，各用药组分别连续给药14天，在造模及用药前后观察大鼠的一般情况，<WP=4>并记录体重；根据排水法原理用容积测量仪测量大鼠后足体积，并记录关节炎指数，观察药物对继发病变的治疗作用。(3)用放射免疫法测定IL-1、IL-6、TNF-α水平。（4）采血后摘取踝关节进行固定、脱钙、石蜡包埋，HE染色，光镜下观察关节病理变化，并进行评分。（5）无菌取出踝关节处的滑膜组织应用免疫组化检测滑膜组织中的MMP3及TIMP1的表达，并采用计算机图像分析的方法对其表达量进行定量分析。（6）应用SPSS统计软件进行统积分析。 结果 1 与模型组比较，灯盏花素组、来氟米特组、联合组均能改善大鼠的一般情况；配伍组给药前后体重增加值与正常组比较，差异无显著性（P＞0.05）；与模型组比较，差异有显著性（P＜0.05）。2 造模后18天各组大鼠之间的关节炎指数与足爪肿胀相比无明显差异（P＞0.05）；给药后，灯盏花素组、来氟米特组、配伍组均能减轻大鼠的足爪肿胀和关节炎指数，与模型组比较，差异显著（P＜0.05）；配伍组较来氟米特、灯盏花素组的作用更明显（P＜0.05)。3 模型组的IL-1、IL-6、TNF-α水平明显高于正常对照组（P＜0.01），用药后各组的细胞因子水平较模型组降低（P＜0.05），配伍组的降低更明显（P＜0.01)。4病理结果显示：模型组大鼠踝关节滑膜组织内有大量的炎性细胞浸润，关节面不完整，有血管翳形成；治疗后，滑膜组织内炎细胞浸润明显减轻，软骨破坏程度减弱。与正常对照组比较，模型组大鼠踝关节的病变积分显著增高（P＜0.01)；各用药组的大鼠关节病变积分与模型组比较，皆明显<WP=5>下降（P＜0.05），三个用药组之间比较，配伍组的关节病变积分最低。5 免疫组化定量分析，模型组大鼠滑膜组织MMP3 表达阳性密度显著高于正常对照组（P＜0.01）；与模型组比较，各用药组的MMP3表达阳性密度均降低（P＜0.01)；配伍组的表达阳性密度与单一用药组比较，差异显著（P＜0.05)。与正常对照组比较，模型组大鼠滑膜组织TIMP-1的表达阳性密度明显降低（P＜0.05）。各用药组的TIMP-1表达阳性密度均明显高于模型组。配伍组的表达密度与单一用药组比较有差异（P＜0.05）。6 IL-1、病理积分与MMP3的相关性分析本实验得出结论：（1）IL-1与MMP3水平之间成正相关（r=0.9051，p=0.0001）；（2）病理积分与MMP3水平之间成正相关（r=0.8961，p=0.0001）。这说明MMP3在RA的软骨破坏中起着重要的作用。IL-1是MMP3的重要调节因素。灯盏花素通过降低血小板水平，影响IL-1的分泌，减少了IL-1对滑膜和软骨的刺激，使MMP3对细胞外基质的降解减轻，从而减弱了RA的软骨破坏。结论 1灯盏花素治疗佐剂性关节炎具有显著疗效，能够明显减轻大鼠的足爪肿胀，降低血清IL-1、IL-6、TNF-α水平；减轻关节的病变损伤积分，减少滑膜组织中MMP3的表达，增加TIMP1的表达。配伍组的效果优于灯盏花素、来氟米特组，证实了中药有效成分与西药配伍应用在实验性关节炎中的增效作用。2灯盏花素注射液治疗类风湿关节炎的可能机制是（1）<WP=6>灯盏花素通过改善血循环，降低血小板水平，减少血清炎性细胞因子的分泌。（2）通过减少细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α的分泌，减轻其对滑膜组织和软骨组织的刺激，抑制AA大鼠滑膜组织MMP3的过度表达，调整MMP3/TIMP1的失衡，从而减轻关节炎的症状和软骨破坏。