【摘 要】
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本论文以磷高效大豆基因型巴西10号为实验材料,采用营养液栽培,设高磷(1mM)、低磷(0.2μM)两个处理,分短期和长期进行采样,通过抑制缩减杂交(SSH)技术构建大豆地上部短期和长期cDN
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本论文以磷高效大豆基因型巴西10号为实验材料,采用营养液栽培,设高磷(1mM)、低磷(0.2μM)两个处理,分短期和长期进行采样,通过抑制缩减杂交(SSH)技术构建大豆地上部短期和长期cDNA文库,获得大豆地上部低磷诱导特异表达的候选基因,并应用生物信息技术对这些候选基因进行了功能预测分析,同时还运用 Northern、RT-PCR等方法对部分候选基因进行了表达模式分析。结果如下:在短期 cDNA文库中共筛选单克隆2000个,但仅发现15个受低磷诱导的阳性克隆,而同源性分析结果表明这些克隆几乎都与同一未知功能的基因同源。长期库中共筛选单克隆3000个,其中在低磷下特异表达的为80个。根据这些克隆同源基因的功能将其分为五组:与代谢途径有关的基因、与发育途径有关的基因、与信号转导途径有关的基因、与遗传信息途径有关的基因及功能未知的基因。其中与代谢途径有关的基因所占比例最大,为38%,其它组基因所占的比例分别为9%、14%、9%、30%。
通过筛选短、长期cDNA文库获得阳性单克隆的数量和这些单克隆同源基因的功能,我们推断,在低磷胁迫的早期主要是由根部感知及启动耐低磷机制,地上部在这一时期基本上不起任何作用,而随着磷胁迫时间的延长,地上部开始在耐低磷机制中发挥主要作用,主要是通过调整一些代谢途径,例如光合作用途径、糖代谢途径、能量代谢途径、脂代谢途径及其它元素的代谢途径来适应低磷胁迫,同时地上部还可能通过一些信号转导途径调控根部适应低磷胁迫。本研究可为进一步阐明植物对磷信号的感应、转导及调控机理,加快磷高效大豆品种的选育提供理论基础。
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