目的:探讨人角膜缘干细胞的培养、鉴定方法。以及人角膜缘干细胞的形态学观察,为临床上应用角膜缘干细胞进行相关治疗奠定基础。方法:取我院眼科2007年手术病人的角膜缘组织。按组织块所取的大小,将其分为两组:其中,Ⅰ组为翼状胬肉患者6例,显微镜下取其一小块角膜缘组织,大约为(1×1mm)。Ⅱ组为摘眼球患者(绝对期青光眼3例,角膜溃疡穿孔2例)5例,取其环周角膜缘组织。两组以相同的方法进行培养,即:(1)都是组织块培养法(2)所用试剂及培养条件相同。用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液、加入10ng/ml的生长因子、100u/ml青霉素和100μg/m1链霉素1:1混合的双抗液、37℃温室培养箱。对人自体角膜缘干细胞进行体外培养,倒置显微镜观察培养细胞体外生长的形态,对培养出的细胞用抗角蛋白K3的单克隆抗体AE5进行鉴定。结果:本实验首先对Ⅰ组6例小组织块进行体外细胞培养,无一例出现细胞生长。为了寻找细胞不生长的原因,我们取Ⅱ组5例病人的环周角膜缘组织块以完全相同的方法进行培养,发现均有细胞生长。我们对培养出的细胞进行形态学观察及鉴定。培养2天后观察发现:细胞体积较小,呈类圆形。4天后观察:细胞排列呈单层,密度均匀,细胞表面有呈长梭形成纤维细胞。6天后观察。细胞近贴满瓶底,细胞体积增大,呈类圆形、多角形等,细胞核为单核或多核。我们用角蛋白K3的单克隆AE5抗体染色,大多数细胞染色阳性,仅少数细胞染色阴性。结论:1,组织块培养法:小块组织块培养无细胞生长,环周角膜缘组织块培养法可以培养出角膜缘干细胞,但培养出来的干细胞数量较少。2,角蛋白K3的单克隆抗体AE5可作为鉴定角膜缘干细胞的方法。