IL-17及JAK抑制剂AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1表达的影响

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目的:白介素-17(Interleukin-17,IL-17)是新近发现的一个促炎症细胞因子,具有致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用,酪氨酸蛋白激酶-信号转导及转录激活因子(Janus kinase signal transducers and activators of transcription,JAKs-STATs)是其发挥作用的途径之一。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter,ABCA1)在细胞中的主要作用为促进细胞内胆固醇运输和减少细胞内的炎症因子。双面神激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂2-氰基-3-(3,4-二羟基苯基)-N-(苯甲基)-2-丙烯酰胺(2-cyano-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide,AG490)为JAK抑制剂,能阻断JAKs-STATs信号通路。本文通过观察IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达情况,探讨IL-17及AG490对泡沫化巨噬细胞的作用。方法:1.检测IL-17对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达情况:THP-单核(Thp-1monocyte,THP-1)细胞经佛波酯(phorbol12-myristate13-acetate,PMA)(100nmol/L)诱导24h-48h形成巨噬细胞,经氧化低密度脂蛋白(oxidizedlow density lipoprotein,ox-LDL)(50μg/mL)泡沫化后建立巨噬细胞泡沫化模型,油红O乙醇染液鉴定泡沫化巨噬细胞。上述泡沫化巨噬细胞中分别加入IL-17(100ng/mL),不同时间点(0h,6h,12h,24h)收取细胞,分别提取RNA及蛋白,RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达。上述泡沫化巨噬细胞中加入IL-17(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL),24h后收取细胞,分别提取RNA及蛋白,RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达。2.检测JAK抑制剂AG490与IL-17对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达情况: IL-17(100ng/mL)及AG490(0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L)共处理泡沫化巨噬细胞24h后收取细胞,分别提取RNA及蛋白,RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达。结果:1.THP-1细胞呈圆形,悬浮生长,经PMA(100nmol/L)诱导24h-48h后成为梭形的贴壁巨噬细胞,并伸出伪足,ox-LDL(50μg/mL)诱导巨噬细胞形成泡沫化巨噬细胞,其特征为脂质成份增多,聚集成滴,能被油红O乙醇染液染成红色。2.随着泡沫化巨噬细胞中IL-17浓度的增加(0ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL),RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达随着IL-17浓度增加而减少(p<0.05),随着泡沫化巨噬细胞中IL-17作用时间的延长(0h、6h、12h、24h),RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达随IL-17作用时间增加而减少(p<0.05)。3.JAK抑制剂AG490与IL-17(100ng/mL)共同处理泡沫化巨噬细胞后,RT-PCR、Western blotting检测ABCA1mRNA及蛋白的表达随着泡沫化巨噬细胞中AG490浓度增加(0umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L)而增加(p<0.05)。结论:1.通过ox-LDL诱导巨噬细胞能够成功构建巨噬细胞泡沫化模型。2.IL-17能够减少泡沫化巨噬细胞ABCA1mRAN及蛋白的表达,并呈时间和浓度依赖性。3.AG490能够减弱IL-17对泡沫化巨噬细胞ABCA1mRNA及蛋白的表达,提示IL-17可能通过JAKs-STATs信号通路影响ABCA1表达。
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