论文部分内容阅读
目的:本课题是在建造脊髓损伤模型后,使用不同穴位配伍进行电针治疗,通过观察脊髓损伤后大鼠行为学评分(Basso,Beattie and Bresnahan locomotor rating scale,BBB评分),脊髓病理改变,脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达变化特点,评价不同穴位配伍电针的疗效,以及不同穴位配伍之间是否存在疗效差异,从而寻找较为合理的电针穴位配伍方案,以为临床针刺治疗穴位配伍提供实验数据和理论依据。方法:本实验将100只SD大鼠,雌雄各半,按照随机数字法分为假手术组、模型组、电针治疗组(EA1、EA2、EA3组),每组各20只大鼠,上述每组再根据不同时间窗分为4个亚组(术后3d、7d、12d、18d),每个亚组5只,使用课题组自制的改良型大鼠Allen’s法制备脊髓损伤模型。电针治疗组穴位配伍组别为:EA1组大椎、命门、夹脊、足三里和三阴交,EA2组大椎、命门、夹脊、水沟和阳陵泉,EA3组大椎、命门、夹脊、肾俞和次髎。术后1d进行电针干预,每日1次,每次30分钟,5天为一个疗程,疗程间休息2天。采用BBB评分,评估大鼠建模后的后肢运动功能,通过HE染色观察脊髓组织病理结构,Nissl染色观察尼氏体变化,免疫组织化学技术观察脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白的表达,总结分析比较治疗组与模型组之间的疗效差异。结果:1.BBB评分结果:脊髓损伤术后不同时间点,模型组大鼠后肢运动功能评分明显降低。治疗3d、7d后,各电针组大鼠后肢运动功能的评分与模型组比较无明显差异,治疗12d后,EA1、EA2组大鼠后肢运动功能评分与模型组比较均升高,具有统计学意义(P﹤0.01),但EA3组与模型组比较差异无统计学意义,治疗18d后,3组电针组大鼠肢体运动功能评分均明显升高,与模型组比较有明显差异(P﹤0.01)。2.HE染色病理结果:假手术组脊髓结构完整,神经元形态清晰。模型组中,脊髓损伤后3d,可见脊髓组织广泛出血,脊髓正常结构破坏;7d、12d脊髓组织结构破坏严重,可见坏死细胞,胶质细胞增多,形成空泡;18d时脊髓组织结构松散,细胞萎缩固化。不同电针组治疗3d后脊髓组织无明显变化,治疗7d、12d后神经元有所修复,细胞坏死减少,治疗18d后疗效更佳。3.Nissl染色病理结果:假手术组脊髓及神经元结构完整清晰,可见饱满的尼氏体。脊髓损伤3d、7d后脊髓灰质、白质结构破坏,神经元尼氏体变少、变小或消失,神经元固缩、细胞核裂解,甚至溶解液化。12d、18d神经元周围可见较大空泡样变。不同电针组治疗3d、7d、12d后神经元尼氏体无明显恢复,治疗18d后可见神经元尼氏体数量和形态有所修复。4.免疫组化染色结果:GFAP阳性细胞位于胞质中,显色为黄棕色。在脊髓组织未损伤时GFAP表达显示星形胶质细胞数量少,胞体小,突起少;脊髓损伤后3d,未见明显GFAP阳性细胞;损伤后7d、12d,GFAP阳性细胞数量逐渐增多,但胞体形态纤细;损伤后18d,GFAP阳性细胞数量较前明显增多,胞体增大,病灶边缘细胞增生更明显。不同电针组治疗后,GFAP阳性细胞数量3d后无明显变化,但7d、12d后GFAP阳性细胞,胞体明显肥大,同时突起增多,病灶边缘增生明显,18d后GFAP阳性细胞减少。结论:BBB评分结果表明:3组不同电针组均能改善大鼠脊髓损伤后肢体运动功能,治疗12d后3组治疗组运动功能评分已明显升高,治疗18d后疗效更加显著。EA1、EA2组疗效优于EA3组。HE染色与Nissl染色病理结果表明:3组不同电针组均能明显改善大鼠脊髓损伤后组织结构及尼氏体病理改变,能保护神经元,减少细胞损伤的数量,治疗18d后疗效更佳,但3组电针治疗组之间无明显疗效差异。免疫组化染色结果表明:经3组不同电针组治疗后,GFAP阳性细胞数量3d时无明显变化,但7d、12d的GFAP阳性细胞,胞体明显肥大,同时突起增多,病灶边缘细胞增生明显,且呈增加趋势,12d时达高峰,18d的GFAP阳性细胞数量减少,胞体仍有增大,但胞体突起减少。3组电针治疗组GFAP阳性面积率与模型组相比均有显著差异,但3组电针治疗组之间无明显疗效差异。综合提示,不同穴位电针治疗组治疗脊髓损伤后,大鼠后肢运动功能明显改善,脊髓结构、尼氏体有所修复,且能通过调控GFAP的表达,利于脊髓损伤的恢复。