【摘 要】
：
目的:湖羊是我国优质的肉用绵羊种类,具有繁殖能力强的优良性状,经实验证实BMPR-1B基因（Fec B突变）是湖羊多胎的主效基因,为进一步探究绵羊多胎主效基因,本研究首先通过检测Fec B基因的RFLP多态性,筛选出携带有Fec B基因突变纯合型的高效繁殖母羊个体,再以该纯合突变个体为材料,进行BMPR-1B基因编码区的克隆,结合Western blot技术的使用,检测并分析原核表达并纯化的BMP
论文部分内容阅读
目的:湖羊是我国优质的肉用绵羊种类,具有繁殖能力强的优良性状,经实验证实BMPR-1B基因（Fec B突变）是湖羊多胎的主效基因,为进一步探究绵羊多胎主效基因,本研究首先通过检测Fec B基因的RFLP多态性,筛选出携带有Fec B基因突变纯合型的高效繁殖母羊个体,再以该纯合突变个体为材料,进行BMPR-1B基因编码区的克隆,结合Western blot技术的使用,检测并分析原核表达并纯化的BMPR-1B蛋白。目的是检测该纯合型母羊不同组织中的表达谱。本实验为检测Fec B基因突变的快速检测方法提供了理论基础和实验依据,也为生产中提高选育肉用绵羊新品种的效率提供事实依据。方法:以湖羊为实验材料,首先验证选取Fec B基因型的实验对象,以其血液基因组DNA为模板对Fec B基因PCR扩增,使用RFLP分析扩增产物,选用AvaⅡ限制性内切酶对PCR产物进行酶切,若与目的片段吻合,则依据所获得的结果确定Fec B的基因类型。为进一步研究湖羊多胎候选基因BMPR-1B,通过反转录获得的湖羊卵巢c DNA,克隆多胎基因BMPR-1B序列,实现以构建原核表达载体的方式开展的BMPR-1B蛋白体外表达和纯化的实验。为检测BMPR-1B蛋白的表达谱,提取湖羊的卵巢、耳朵、肾脏、骨骼、骨骼肌不同组织的蛋白,使用上述方法分析BMPR-1B蛋白的表达水平。此外,为深入探究BMPR-1B的构造和具体功能,对该基因结构的理化性质、亲/疏水性、三级结构、功能域、跨膜结构域等性状展开生物信息学领域的分析。结果:（1）以湖羊血液中提取基因组DNA为模板进行扩增,使用Vpa K11BⅠ（AvaⅡ）内切酶对前述步骤的扩增产物进行限制性片段长度多态性分析,最终呈现酶切产物鉴定为两条带,即说明湖羊Fec B基因在746处发生突变,证明实验选取湖羊Fec B基因型为纯合突变BB型。（2）实验材料选用湖羊生殖器官-卵巢,经反转录PCR获取目标基因片段,对BMPR-1B基因进行克隆,构建原核体外表达载体并对获取的重组蛋白进行纯化处理,据此生成标准曲线图像,再结合固定数值和计算公式测定蛋白浓度,结果显示为995μg·m L-1。使用预先选定的Western blot技术验证重组蛋白表达成功。经过对湖羊卵巢、耳朵、肾脏、肝脏、骨骼肌5种组织全蛋白的提取、重组和纯化,以同样的技术对BMPR-1B蛋白表达谱展开实质性分析,检测出BMPR-1B蛋白的表达体现在卵巢、耳朵、肾脏、骨骼肌中,且在卵巢中高表达,而在肝脏中却不表达,说明BMPR-1B蛋白在不同的组织中具有表达差异性。（3）生物信息学方法分析BMPR-1B序列理化性质,BMPR-1B为脂溶性跨膜蛋白,为激酶类膜受体蛋白。蛋白质网络互作分析表明,BMPR-1B与多个蛋白相互作用,其中包括骨形态发生蛋白及SMAD家族蛋白。结论:（1）RFLP多态性方法检测实验选取湖羊的Fec B基因在746处发生突变,即为高效繁殖BB型母羊群。为进一步建立Fec B基因纯合高效繁殖BB型母羊群奠定基础。（2）成功构建重组表达载体BMPR-1B,在其宿主大肠杆菌中诱导表达并纯化重组蛋白BMPR-1B,用Western blot技术验证纯化蛋白为目标蛋白,这为绵羊BMPR-1B的理论研究提供了理论依据。（3）Western blot技术分析BMPR-1B蛋白表达谱,发现在湖羊卵巢、耳朵、肾脏、骨骼肌中表达具有特异性,为BMPR-1B蛋白功能研究奠定基础。（4）生物信息学方法对湖羊BMPR-1B基因序列及蛋白进行结构及功能的预测分析,此过程对于深入开展BMPR-1B性质和功能的研究具有重要理论参考意义。
其他文献
要破解“海量阅读能力”和“深度阅读能力”同步发展的教育难题，需深入梳理儿童阅读与阅读教学的关系，辩证分析电子阅读与纸质阅读的内在逻辑，准确把握海量阅读与深度阅读、课内阅读与课外阅读、价值性与工具性的实践张力，系统构建具有三重张力结构的阅读教学体系，以育人价值引发海量阅读与深度阅读的内在潜力，以阅读关联触发课内阅读和课外阅读的合力，以多元评价突破价值性和工具性的外在活力，使阅读教学全面、深刻、立体。
西兰花是一种富含丰富的营养成分和高营养价值的蔬菜。硫苷经过黑芥子酶水解产生的萝卜硫素具有较高的抗癌活性。硒和硫同属于VIA族元素,硒硫之间具有竞争抑制作用和协同作用。通过施肥等营养强化技术手段提高西兰花中营养素和功能成分的含量是今后农业发展的重要方向。本研究以西兰花品种“耐寒优秀”为试验材料,以Na2Se O3为硒源,K2SO4为硫源,进行了7个硒水平单因素Na2Se O3试验,4个硫水平K2SO
目的 探讨护理人员WMSDs的影响因素，为干预WMSDs发生提供理论依据。方法 采用整群抽样方法，抽取银川市9家医院部分科室在岗护理人员作为研究对象，采用肌肉骨骼疾患调查问卷进行调查，分析个体因素、动态负荷、静态负荷、体力负荷、工效环境因素以及劳动组织因素对护理人员WMSDs患病率的影响。结果 WMSDs患病率为66.55%,Logistic回归分析结果显示，工间休息时间充足是WMSDs的保护性因
随着教育改革的不断深化，高职教育在高等教育中占据的比重也逐渐增大。然而受到众多条件的限制，部分高职院校学生在学习中存在主动性不强、没有明确目标、学习态度不端正和学习兴趣不高等问题，如果长期得不到改善，就会影响他们的求知观和人生态度。借助积极心理学可以有效调动学生学习的积极性和主动性，从而提高学生的学习水平。因此，如何有效借助积极心理学激发学生的学习动机，是当前教师需要探究的重要课题。对此，本文在分
本研究选取不同抗旱类型的230份马铃薯材料,通过多种抗旱分析法的组合分析筛选出优质抗旱材料,通过将抗旱性状数据与全基因组关联分析相结合,进一步分析筛选获得显著SNP位点,并根据注释库信息获得显著SNP附近的候选基因,分析结果如下:1.基于抗旱系数、抗旱指数和抗逆指数三种抗旱性分析方法的通过模糊隶属函数分别进行抗旱性评价。通过对三种分析结果进行综合分析为230份试验材料进行抗旱等级的划分。筛选出优质
花青素具有较高的营养价值,彩色马铃薯中花青素含量是普通马铃薯的3～4倍,但是有关马铃薯中花青素生物合成相关转录因子及其调控的分子机制尚不明确。随着我国马铃薯育成品种的不断增加,快速准确鉴别马铃薯品种变得格外重要。本研究以来自国际马铃薯研究中心（CIP）、中国农业科学院蔬菜花卉所、河北北方学院旱作农业研究中心等马铃薯选育单位的26份马铃薯为试验材料,利用形态学标记和分子标记的方法进行分析,并根据分子
现代战场瞬息万变，及时掌握战场信息已成为胜利的关键，未来战争的形态正逐步向“制信息权”方向发展，兵器之间的较量演进为其上层信息系统之间的较量。文章首先回顾了美国军队陆、海、空、天四大领域信息系统及装备的发展历程，其次对美国军队信息系统特点和发展趋势进行了分析，最后提出了对我国军事信息系统建设和发展的启示及建议。
PET制品的食品模拟物中的间苯二甲酸通过高效液相色谱进行分离，采用紫外检测器进行检测。水基、酸性、酒精类食品模拟物直接进样测定，橄榄油介质食品模拟物通过稀的甲醇-水溶液提取后进样测定。采用外标法定量。试验结果表明，食品模拟物中间苯二甲酸浓度在0.8 mg/L～16 mg/L范围内线性良好（R~2＞0.999），检出限为0.3 mg/L。按照建立的方法进行加标回收试验，回收率在91.52%～102.
燕麦（Avena sativa L.）隶属于禾本科燕麦属,是全球仅次于小麦、玉米、水稻、马铃薯、大麦以及高粱的第七大栽培作物。我国作为栽培燕麦的起源中心之一,具有悠久的种植历史,但目前燕麦新品种选育主要以传统育种为主。随着杂种优势在作物上的广泛应用,燕麦的杂交育种也逐渐提上日程,从而改进了燕麦新品种选育的方法。本研究以提高燕麦育种效率为目的,通过改进燕麦杂交技术提高了杂交结实率,并通过建立合适的品
由葡萄生单轴霉（Plasmopara viticola）引起的霜霉病是葡萄生产中最主要、最严重的病害之一,其中化学防治是防治葡萄霜霉病最有效办法,但化学药剂的大量且频繁使用,使病原菌的抗药性日益严重,导致药剂防效下降。本研究就常用杀菌剂对葡萄霜霉病的田间药效进行了评价。以葡萄霜霉病菌为研究对象,采用叶盘漂浮法对霜脲氰和甲霜灵的抗性、采用Taqman-MGB分子检测技术对嘧菌酯和烯酰吗啉的抗性分别进