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目的由于过敏性疾病的发病率不断升高,因此,建立有效的体外检测手段对于过敏性疾病的预防和治疗具有重要的意义。本研究主要是利用鲁米诺氧通道免疫分析技术建立总IgE的定量检测方法,并对所建立的方法进行方法学评价；在此基础上,对该检测体系进行改进,以中华绒螯蟹为例,采用鲁米诺氧通道免疫分析技术建立血清特异性IgE的定量检测方法,并对该反应体系基质、反应条件及反应模式进行摸索优化。方法1.总IgE检测方法的建立：将受体微球包被鼠抗人IgE单克隆抗体,兔抗人IgE多克隆抗体标记生物素,建立检测总IgE的反应体系,并对所建立的方法进行方法学评价。2.特异性IgE检测方法的建立：提取中华绒螯蟹蛋白后标记生物素,以中华绒螯蟹为例,建立检测特异性IgE的方法,并对所建立方法的反应时间、反应基质等分析条件进行优化。3.分析测定临床标本未取得满意结果原因：通过SDS-PAGE、斑点印迹等方法分别从生物素化蟹蛋白、受体微球等试剂方面寻找未能成功检测特异性IgE的原因。结果1.总IgE方法学评价：本研究所建立方法的批内变异系数为3.33%-5.83%,批间变异系数为5.33%-9.40%；该方法的灵敏度为2.75IU/ml;回收率为98.11%-100.7%。通过检测123例正常人血清总IgE值可知本实验建立方法的正常人参考值上限为225IU/ml;干扰性分析中,溶血、黄疸及脂血的干扰率均<10%；用本实验建立的方法检测30份临床标本与Beckman Coulter Immage800透射免疫比浊法的检测结果具有良好的相关性,r=0.962。2.所提取的中华绒螯蟹蛋白经SDS-PAGE电泳分析可知,蟹蛋白粗提液中清晰可见的主要蛋白有10条,其相对分子量分别为98kD、85kD、77kD、55kD、48kD、45kD、39kD、36kD、33kD;提取的蟹蛋白能够与收集的蟹过敏患者血清反应,说明提取蟹蛋白具有免疫活性。3.通过斑点印迹可知,收集自医院的阳性血清中含有特异性IgE；所提取蛋白经生物素化处理后仍具有免疫活性,但通过SDS-PAGE分析可知,生物素化蟹蛋白仅能够在85kID和77kD处看到明显条带。结论1.本研究中所建立的方法能够用于定量检测血清总IgE水平,且具有灵敏度强,准确性高,重复性好,便于操作等优点,适用于临床使用。2.采用丙酮抽提法所提取蛋白成分基本完整,且具有免疫活性,可作为已知抗原用于检测特异性IgE。3.粗提蛋白经标记生物素处理后,蛋白组份丢失或降解,可能是导致本方法不能有效检测血清特异性IgE的原因。