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微藻是一类重要的海洋微生物,目前的研究绝大部分是对糖类、萜类及多酚类的活性研究,而对蛋白质及多肽类的研究很少。本研究基于对裂殖壶菌微藻藻粕的酶解提取物进行抗炎抗菌活性分析研究,并进行初步的机制探索。首先,通过确立裂殖壶菌藻粕的最佳酶解条件,并对酶解产物进行LC-MS质谱分析和紫外分光光度计法测定产物中蛋白含量。研究表明,在3%胃蛋白酶和3%胰蛋白酶作用6 h时酶解提取物的冷冻干燥回收率最高,高达47.95%;酶解提取物通过LC-MS质谱分析及紫外分光光度法测蛋白含量结果看出,纯化后的酶解提取物主要是分子量不超过3000 Da的蛋白肽类物质。其次,进行酶解肽对小鼠的抗炎活性研究及初步抗炎机制探索。制作用二甲苯致炎小鼠模型,分别测定酶解提取物高剂量组(1000 mg/kg),中剂量组(500 mg/kg)及低剂量组(250 mg/kg),对致炎小鼠耳廓肿胀度的影响。结果表明,在酶解肽浓度为500 mg/kg时,小鼠耳廓肿胀率最低,仅为49.85%;同时,通过小鼠右后足足趾注射1%角叉菜胶,测定了高中低剂量组对致炎足超氧化物歧化酶(SOD)活性、炎症组织渗出物中丙二醛(MDA)含量、蛋白含量及前列腺素E2(PEG2)含量的影响。结果显示,中剂量组(500 mg/kg)的SOD活性最高,达到109.79 U/mg,而蛋白浓度却最低,仅为0.598 g/L;而炎症组织渗出物MDA和PGE2在此浓度时最低,分别为1.142 nmol/mgprot和在278 nm处PGE2吸光度最低,只有0.141。由此可见,酶解肽对炎症都具有治疗作用。最后,本课题还应用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌进行酶解肽抑菌活性测试。在酶解肽浓度梯度(120mg/ml、100mg/ml、80mg/ml、60mg/ml、40mg/ml、20mg/ml、0mg/ml)下测定各抑菌效果。结果表明,裂殖壶菌藻粕酶解肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌都具有不同程度的抑菌作用,酶解肽浓度在100 mg/ml以上对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌接近100%抑制作用,而沙门氏菌则抑菌作用相对较弱,仅在培养12 h时,其在100 mg/ml浓度下时其抑菌率为58%。而且通过与非酶解组对比可以确定起抑菌作用的主要是酶解肽。综上所述,酶解提取物中含有生物活性肽,该活性肽不仅具有抗炎症及抑制微生物生长作用,而且还有一定的治疗炎症作用。而且该活性肽主要活性物质是不超过3000 Da的小肽或小肽混合物。