烟草SR45基因的克隆、表达及特性分析

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前体mRNA中内含子的精确识别和清除是真核生物中基因表达调控的重要机制之一。富含丝氨酸/精氨酸的蛋白(Serine/Arginine-rich proteins, SR protein)是真核生物中一类高度保守的剪接因子,参与前体mRNA的剪接加工过程。SR45蛋白属于植物特异SR蛋白,在植物的生长发育、胁迫应答调控过程中发挥着重要的作用。本研究利用烟草EST数据库,以拟南芥AtSR45基因序列为探针,经比对、拼接获得一个烟草未知序列,并以烟草NC89的cDNA为材料,对该未知序列进行了克隆、验证、基因表达特性分析、转录活性检测、亚细胞定位检测等。获得以下结果:(1)克隆得到的NtSR45基因,编码413个氨基酸残基,具有一个位于105-172位置的RRM结构域,且RRM域两端分别有一个RS域,属于植物SR蛋白中特殊的一类蛋白。其NCBI登录号为JX846906。(2) NtSR45基因的组织特异性分析表明:NtSR45基因在烟草幼苗叶中的表达高于根、茎,花中的表达高于成熟期的根、茎和叶。(3)NtSR45基因的表达特异性分析表明:NtSR45基因受低温、高盐、ABA、MeJA和GA的表达调控作用显著;在低温、干旱、高盐、ABA和乙烯的胁迫处理下,NtSR45基因的表达量下调;在MeJA、SA和GA的处理下NtSR45的表达呈上调模式,且其上调的表达量呈先逐渐增加至最大值,后逐渐减小的模式;在高温的诱导下,NtSR45基因表达量呈先下调后上调的模式。(4)酵母自激活实验表明,NtSR45蛋白及其RS1、RS2域具有酵母转录激活功能,其RRM域不具有酵母转录激活功能。(5)利用洋葱表皮细胞GFP亚细胞定位的方法检测NtSR45蛋白定位特性,表明NtSR45蛋白定位于细胞核和细胞质,进一步的缺失实验表明核定位关键区在RS域。
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