本实验研究了新月弯孢霉细胞色素P450酶与甾体11β-羟基化的关系，选育具有酮康唑抗性标记的氢化可的松高产菌株KA-91，并对其发酵条件工艺优化。主要研究内容和结果如下： 1、通过CO差光谱法检测到新月弯孢霉细胞中存在P450酶。苯巴比妥钠和过氧化物酶增殖剂邻苯二甲酸异辛酯以及RSA均对P450酶具有诱导作用。酮康唑对P450酶具有抑制作用。P450酶含量与氢化可的松的生成具有正相关性。 2、确立了新月弯孢霉原生质体的适宜形成与再生条件：将培养22h的菌丝用0.3mol／L的二硫苏糖醇处理20min，0.6mol／L的KC1作为渗稳剂，30℃条件下经0.5％新生酶234和1％纤维素酶混合液(pH5.6)酶解3h，原生质体释放量达到7.76×10~6个／mL，再生率为23.07％。再生菌株菌落形态不变，保留了甾体11β-羟基化能力。 3、采用NTG和紫外线复合诱变，结合酮康唑抗性筛选法，选育出氢化可的松高产菌株KA-91，氢化可的松转化率达到63.05％。将菌株KA-91连续5次转接斜面，发现菌株遗传性能稳定。 4、确立了KA-91生产氢化可的松的适宜摇瓶分批发酵条件：发酵培养基为葡萄糖22g／L，牛肉膏5g／L，酵母膏4g／L；初始和转化pH6.5；装液量30mL／250mL三角瓶；摇瓶转速0～6h：160 r／min；6～68h：200 r／min；发酵温度28℃；发酵周期72h。采用改进工艺和最适投料方法，RSA投料浓度为1.0g／L时，氢化可的松转化率达到74.88％。 以适宜摇瓶分批发酵条件为基础，对氢化可的松高产菌KA-91进行了7L罐分批发酵试验，发酵周期68h，氢化可的松转化率达到77.92％。