有机磷农药是一类具有广谱杀虫特性和较低稳定性的农药,已被广泛应用于农业生产中。但是,有机磷农药会抑制胆碱酯酶的活性,过度或不合理的使用会对人类健康构成威胁,因此,建立一种快速、简单、准确的检测环境和食物中有机磷农药残留的分析方法是十分必要的。酶联免疫吸附测定(ELISA)具有检测成本低、检测速度快并且可以同时检测多个样品的优势,被广泛地应用于有机磷农药残留检测。本实验室前期制备的有机磷农药宽谱单克隆抗体3A7具有较好的宽谱特异性,但是仍存在灵敏度不足的问题。为了进一步提高检测的灵敏度,本研究采用噬菌体展示技术筛选有机磷农药的抗原模拟表位,并建立了更加灵敏的基于噬菌体模拟表位的免疫分析方法。主要研究结果如下:(1)本研究以有机磷农药宽谱特异性单克隆抗体3A7为靶标,同时使用噬菌体随机展示线性七肽库、线性十二肽库和环七肽库混合肽库,经过四轮生物淘选成功地将噬菌体进行了富集,回收率从1.2×10-7提高到了1.1×10-2。挑取179个噬菌体单克隆用于间接竞争ELISA检测,在250ng/mL对硫磷存在下,有竞争作用的有91个,挑取效果较好的14个单克隆进行测序。测序结果表明,筛选到了5种有机磷农药模拟表位,包括1种线性七肽模拟表位和4种线性十二肽模拟表位。(2)为了使建立的P-ELISA具有更高的灵敏度,以Amax/IC50的比值为标准选择了噬菌体肽21为最佳的噬菌体抗原。通过对甲醇浓度、脱脂奶粉浓度、pH和离子强度的优化,确定了噬菌体肽21使用的最优条件为pH6.5,5×PBS,2.5%甲醇和0.4%脱脂奶粉。(3)在最优检测条件下,建立的P-ELISA对多种有机磷农药具有交叉反应,尤其是对8种O,O-二乙基类和6种O,O-二甲基类有机磷农药具有较强的交叉反应,对这14种农药的IC50值在5.24-63.25ng/mL之间,平均IC50值为37.04ng/mL,变异系数为42.98%。与化学合成包被原建立的异源ELISA相比,P-ELISA对有机磷农药的灵敏度都有所提高,对倍硫磷的灵敏度提高了3倍以上,除对甲基毒死蜱和乙基嘧啶磷的灵敏度提高2倍外,对其余17种有机磷农药的灵敏度均提高了1倍左右。(4)样品的添加回收实验结果显示,对硫磷、倍硫磷、二嗪农和杀螟硫磷在黄瓜、生菜、苹果和西瓜样品中的添加回收率在82.03-103.63%之间,变异系数在2.31-13.80%之间,说明建立的P-ELISA检测方法适用于蔬菜和水果等样品中的有机磷农药残留检测。总之,噬菌体具有无毒、易扩增、灵敏度高和使用方便等优势,可以作为化学合成抗原的替代品用于建立异源竞争分析方法。