【摘 要】
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甜瓜是一种重要的园艺类瓜果作物,在全世界被广泛栽培。因其营养丰富、口感极佳,深受消费者喜爱,故研究甜瓜果实成熟具有重要意义。目前有关脱落酸受体参与果实成熟的研究主要集中在番茄和草莓,其它肉质果实的相关研究较少。本文以甜瓜品种河套蜜瓜为研究材料,探究了脱落酸（ABA）受体基因CmPYL4和CmPYR1基因在甜瓜果实成熟过程中的作用,取得的主要结果如下:（1）对甜瓜脱落酸受体基因家族成员进行了鉴定,得
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31860563）； 内蒙古自治区应用技术研究与开发资金（2021PT0001）； 内蒙古自治区自然科学基金项目（2021BS03002）； 内蒙古大学高层次引进人才启动资金（10000-21311201/056）；
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甜瓜是一种重要的园艺类瓜果作物,在全世界被广泛栽培。因其营养丰富、口感极佳,深受消费者喜爱,故研究甜瓜果实成熟具有重要意义。目前有关脱落酸受体参与果实成熟的研究主要集中在番茄和草莓,其它肉质果实的相关研究较少。本文以甜瓜品种河套蜜瓜为研究材料,探究了脱落酸（ABA）受体基因CmPYL4和CmPYR1基因在甜瓜果实成熟过程中的作用,取得的主要结果如下:（1）对甜瓜脱落酸受体基因家族成员进行了鉴定,得到甜瓜脱落酸受体基因家族成员共计12个;家族成员编码的蛋白具有疏水的配体结合结构域;多序列比对得到35个完全保守的氨基酸位点;系统发育树分析可将该家族分为3个亚家族;表达量热图发现CmPYL4、CmPYR1基因在果实中高表达。（2）基因表达模式分析表明:CmPYL4基因在根中有少量表达,除此之外主要在果实和种子中高表达;在授粉后38天至44天时间段内,CmPYL4基因在果实的种子中的表达量逐渐降低,果肉中的表达量反而逐渐升高。CmPYR1基因在所有组织中都表达,其中在根、两性花、雄花、授粉后40天和42天果实的中果肉中有较高表达量;在授粉后38天至44天时间段内,CmPYR1基因在种子中的表达量逐渐降低。（3）以甜瓜成熟期果实中果肉总RNA为模板克隆了CmPYL4、CmPYR1基因的c DNA,并将其与过表达载体p PZP221连接;同时设计合适的双靶点,构建了CmPYL4、CmPYR1的基因编辑载体;此外还构建了CmPYL4、CmPYR1基因的亚细胞定位载体,并在烟草中瞬时表达,表明CmPYL4、CmPYR1蛋白定位于细胞膜。（4）利用子房注射法转化甜瓜,经自交和加代,获得了T3代CmPYL4、CmPYR1超表达转基因纯合株系。与野生型甜瓜40.1天的成熟期相比,T3代CmPYL4超表达转基因纯合株系PYL4-Oe21、PYL4-Oe79、PYL4-Oe125目的基因表达量分别是野生型的3.6倍、3.9倍、3.1倍,成熟期分别为37天、37天、37.2天。T3代CmPYR1超表达转基因纯合株系PYR1-Oe6、PYR1-Oe56、PYR1-Oe88目的基因表达量分别是野生型的9.5倍、9.7倍、10.5倍,成熟期分别为35天、35天、35.1天,显著小于野生型对照果实的成熟期。（5）进行了CmPYL4、CmPYR1基因的酵母双杂交试验,CmPYL4和CmPYR1蛋白都与MELO3C013082.2.1蛋白存在互作关系;且在50μmol/L的脱落酸浓度下CmPYR1蛋白与MELO3C015408.2.1蛋白也发生了互作。（6）原位杂交试验表明CmPYL4基因在胚珠中表达、CmPYR1基因在花粉中表达。
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