【摘 要】
：
研究目的:内皮细胞功能障碍是糖尿病创面慢性不愈合机制之一,可能和糖尿病创面中miR-31-5p表达下调有关。miR-31-5p能否改善内皮细胞功能,牛乳来源外泌体能否提高miRNA治疗的稳定性和效率还不得而知。本课题探究了miR-31-5p对于内皮细胞功能的影响及其下游机制,并将其电转入牛乳外泌体建立工程化外泌体来促进糖尿病创面愈合。实验方法:检测正常小鼠和糖尿病小鼠创面中miR-31-5p表达情
【基金项目】
：
中国国家自然科学基金项目（No.81772094和No.81974289）；
论文部分内容阅读
研究目的:内皮细胞功能障碍是糖尿病创面慢性不愈合机制之一,可能和糖尿病创面中miR-31-5p表达下调有关。miR-31-5p能否改善内皮细胞功能,牛乳来源外泌体能否提高miRNA治疗的稳定性和效率还不得而知。本课题探究了miR-31-5p对于内皮细胞功能的影响及其下游机制,并将其电转入牛乳外泌体建立工程化外泌体来促进糖尿病创面愈合。实验方法:检测正常小鼠和糖尿病小鼠创面中miR-31-5p表达情况。将miR-31-5p转染入内皮细胞,分别用EdU、transwell、小管形成实验检测细胞增殖、迁移、成管功能。通过生物信息学网站、western blot、双荧光素酶实验预测并验证miR-31-5p的靶基因和具体靶点。通过回复实验进一步验证miR-31-5p及其靶基因对内皮细胞功能的影响。运用电穿孔技术将miR-31-5p转染入牛乳外泌体,比较工程化外泌体和游离miR-31-5p稳定性的同时,在体内和体外层面检测工程化外泌体的功能。实验结果:糖尿病小鼠创面中miR-31-5p表达下调。外源性过表达miR-31-5p能通过靶向并下调其靶基因HIF1AN,来提高内皮细胞增殖、迁移、成管功能。应用电穿孔技术成功将miR-31-5p电转入高产量的牛乳外泌体建立了工程化牛乳外泌体。相较于游离miR-31-5p,工程化外泌体提高了miRNA稳定性、穿透性和递送效率。体外实验中,工程化外泌体显著提高了内皮细胞增殖、迁移、成管功能,体内实验中,工程化外泌体通过提高再上皮化、胶原沉积、血管再生,促进糖尿病创面愈合。结论:miR-31-5p/HIF1AN轴表达异常是糖尿病创面中内皮细胞功能障碍的重要原因。miR-31-5p通过靶向HIF1AN从而改善内皮细胞功能,促进糖尿病创面愈合。牛乳外泌体作为一种理想的天然纳米载体,产量大,具有工业生产的前景,用于miRNA的递送不易引起机体不良反应、能提高miRNA稳定性、组织相容性和递送效率,为优化miRNA治疗方法提供新策略。
其他文献
【目的】县域医共体建设及医保支付方式改革是医疗卫生体制改革关注的热点问题。本研究构建价值导向下县域医共体按人头总额预付的支付标准确定的概念模型,力图为合理确定有效的按人头付费标准提供理论支撑。【方法】（1）资料收集:在各类政府网站与数据库搜索县域医共体、医保支付方式改革、按人头付费标准相关的政策文件与国内外文献;选取较早进行县域医共体与按人头总额预付改革的安徽省进行调研,将阜南县作为现场调研地区;
中医文化课程与高职高专医学院校学生医学理论学习及人文素质养成关系密切,因此,亟需促使优秀传统文化融入高职高专医学院校中医文化课程群。本文系统探析了人文素质教育的内涵及医学人文教育的必要性,阐述了优秀传统文化在高职高专医学院校人文素质教育中的价值,分析了高职高专医学院校中医文化课程群构建的意义,进而提出了优秀传统文化融入高职高专医学院校中医文化课程群的创新路径。
目的了解重度子痫前期（sPE）患者与正常孕妇母体血浆外泌体miRNA表达谱的差异,探讨sPE患者血浆外泌体中异常表达的miRNA可能的调控机制。方法（1）使用差速离心法提取外泌体,并通过电镜、NTA、western blotting鉴定外泌体;（2）通过Illumina HiSeq 2000高通量测序检测外泌体miRNA表达谱;（3）通过R语言分析血浆外泌体miRNA的表达差异,并对差异表达miR
目的:构建基于表面增强拉曼散射标签编码磁珠（surface-enhanced Raman scattering tags encoded magnetic bead,SERS-MB）的多种蛋白肿瘤标志物单分子检测平台。方法:以球形金纳米粒子为增强基底,多聚赖氨酸（poly-L-lysine,pLL）为保护层合成三种不同的SERS标签。通过SERS标签的排列组合构建七种稳定的、可区分的SERS-MB
目的:通过检测CDR1AS、miRNA-432-5p、SOX9在压力造模的退变髓核细胞（NP）及正常髓核细胞表达量的不同,比较退变髓核细胞及正常髓核细胞差异性表达区别。通过过表达（OE）及干扰（si）三者表达量,判断三者之间的关系、作用机制及三者对于缓解椎间盘退变的意义。同时通过检测退变髓核细胞及正常髓核细胞分泌的外泌体中CDR1AS含量,分析不同外泌体对抑制椎间盘退变的可能性。方法:通过过往实验
目的距腓前韧带损伤是踝关节扭伤时最常见的韧带损伤之一,经保守治疗无效时常常需要手术治疗。距腓前韧带的解剖数据对于手术修复和重建距腓前韧带有着重要意义。目前对于距腓前韧带的研究均来自于国外的尸体解剖数据,而中国人群中距腓前韧带的解剖数据尚未见报道。本研究使用三维磁共振薄层扫描数据建立距腓前韧带的三维模型,并在三维模型上测量和统计中国人群中距腓前韧带的解剖数据。方法对58名无踝关节症状的志愿者进行踝关
目的:骨髓间充质干细胞（Bone-derived mesenchymal stem cell,BMSC）治疗是椎间盘退变的一种治疗方式。但是,退变椎间盘组织微环境不利于BMSC的增殖、分化等生理活动,从而影响治疗效果。本研究旨在探究过表达SIRT6蛋白对骨髓间充质干细胞细胞活性的影响以及对椎间盘退变的治疗效果。方法:不同浓度tbhp（0,40,80,120μM）处理BMSC体外模拟退变椎间盘组织微
背景:心肌纤维化（myocardiac fibrosis,MF）是心肌组织结构中胶原纤维的过度沉积所致,是多种心血管疾病终末期的共同病理改变[1]。现对于心肌纤维化尚无有效的干预方法。因此,寻找有效的治疗手段,来预防和改善心肌纤维化具有重大意义。单核巨噬细胞可分化成为M1或M2亚类。M1型巨噬细胞促进炎症,拮抗纤维化。M2型巨噬细胞具有拮抗炎症和促进纤维化等功能。当心脏受到低灌注、高压力和炎症等因
目的:随着全球人口老龄化,骨质疏松的患病率正逐年上升,尤其在绝经后女性中。然而,目前可用的治疗方案存在各种相关的不良反应。因此,研发低副作用的疗法很有必要。方法:首先构建卵巢切除小鼠模型模拟绝经后女性,4周后给药一种新型的SHIP1临床阶段的激活剂AQX-1125,持续给药4周。处死小鼠,收集股骨做micro-CT分析和苏木素伊红（HE）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和骨钙素（OCN）免疫荧光染
目的:为了缓解临床诊疗活动中的对骨植入材料的需求,迫切需要找到一个合适的具有优异生物力学性能和生物相容性的骨植入材料。聚醚醚酮（PEEK）由于其良好的机械性能和生物相容性,是骨内植入物的首选替代材料。然而,PEEK较差的骨整合性能限制了其临床应用。为了提高PEEK骨骼支架的骨整合性能,这项研究通过多孔支架与人骨髓间充质干细胞的相互作用和动物实验研究了PEEK-PLA-HA复合材料多孔支架的生物相容