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Interleukin-1(IL-1)家族是一类多功能的细胞因子,目前在哺乳动物中共发现了11个成员(IL-1F1-IL-1F11),通过IL-1受体(IL-1 Receptor)家族发挥不同的生物学功能,参与启动机体的免疫和炎症反应,是脊椎动物中才出现的一类重要的免疫细胞因子。因此,在低等脊椎动物中对IL-1的研究对该家族的起源和进化有着非常重要的意义。IL-1家族中的IL-1F5,IL-1F10和IL-1receptor antagonist(IL-1Ra)在进化树上有着非常接近的关系,三者很可能起源于同一个IL-1Ra样的祖先分子。而目前的研究发现IL-1F5与IL-1R家族的成员single immunoglobulin IL-1R related molecule (SIGIRR)有着密切的关系,实验证实IL-1F5可能通过SIGIRR发挥免疫调控的作用。在鱼类中已经发现了存在SIGIRR的同系物double immunoglobulin IL-1R related molecule (DIGIRR),但是至今在鱼类或其他低等脊椎动物中都没有发现除了IL-1p和IL-18之外的IL-1家族成员。本文运用生物信息学技术,成功地发现和克隆了鱼类IL-1家族中的一个重要成员IL-1Ra-like (TnIL-1Ra-like),并进行了IL-1Ra-like的基因结构分析,系统进化分析、原核表达和蛋白纯化研究。同时我们还预测了多种鱼类中IL-1Ra-like可能的受体分子DIGIRR基因,构建了DIGIRR绿色荧光真核表达载体,并在HepG2细胞完成了DIGIRR-EGFP融合蛋白的表达。TnIL-1Ra-like cDNA ORF序列长591bp,TnIL-1Ra基因编码由196个氨基酸组成、分子量为22.4kDa、pI为6.45的多肽。基因结构分析显示TnIL-1Ra与哺乳动物中的IL-1Ra,IL-1F5及IL-1F10结构相似,都含有四个编码外显子,除第一个外显子大小有所差异,其余三个外显子都较一致,提示三者较相近的进化关系。序列比对显示TnIL-1Ra-like与其它物种IL-1Ra,IL-1F5及IL-1F10之间的氨基酸有一定的相似度,但是物种间的差异较大,说明IL-1Ra在进化中的保守程度不高。将TnIL-1Ra-like的ORF亚克隆到原核表达载体pET28a上,得到重组载体TnIL-1Ra-like-pET28a,经测序表明,目的基因序列及读码框均正确,表达载体构建成功。用IPTG诱导使表达菌株大量表达目的蛋白,Ni-NTA纯化后能够得到较纯的分子量为26.2Kd单一条带,为研究鱼类TnIL-1Ra-like在进化和免疫反应中的作用打下了基础。