青蒿内生真菌抗植物病原菌的研究

来源 :贵州大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:jessiexsu
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植物内生真菌是巨大的微生物资源,在工农业生产与医药卫生方面方面有重大意义,抗菌内生真菌已成为人们研究的热点,能够产生许多新的活性物质,不但可以用于医药新药研发,还能用于农业植物病害防治。中药青蒿作为传统中药,广泛用于治疗多种疾病,其内生真菌具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化等活性。本研究以34株青蒿内生真菌为实验材料,分别与猕猴桃褐腐病菌Botryosphaeria dothidea B12、猕猴桃炭疽病菌Collectotrichum sp.B6、猕猴桃褐腐病菌Monilinia laxa LHF、猕猴桃软腐病菌phoma sp.HGHM、猕猴桃褐斑病菌Alternaria alternate RSF五种常见的猕猴桃病原真菌做平板对峙实验。结果发现菌株WC-QHY-02-03具有较好的抑菌活性,抗菌谱最广,对猕猴桃软腐病菌HGHM的抑制效果最好,抑制率高达81.16%,对其他几种猕猴桃病原真菌的抑制率也均在50%以上。对菌株WC-QHY-02-03的生物学特性进行研究,结果显示该菌株生长的适宜温度为24-32℃,最适p H为6.0,最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为酵母粉。结合形态学与分子系统发育的方法,确定该菌株为哈茨木霉Trichoderma harzianum。发酵条件优化实验显示,最佳的培养条件为:蔗糖30.0 g/L、Na NO3 12.0 g/L、Mg SO4 1.5 g/L、K2HPO4 3.0 g/L。接种量为4%、培养基初始p H值7.0,120 r/min摇床发酵12 d。优化后发酵液对三种猕猴桃病原真菌均有抑制效果,发酵液浓度为100%时对猕猴桃褐腐病菌B12、猕猴桃炭疽病菌B6、猕猴桃褐斑病菌RSF三种病害菌的抑制率分别达到了80.26%、79.12%、45.84%。该菌株发酵液乙酸乙酯粗提物对猕猴桃炭疽病菌B6、猕猴桃褐腐病菌B12、猕猴桃软腐病菌HGHM和猕猴桃褐斑病菌RSF四种猕猴桃病害真菌均有较好的抑菌活性。对该粗提物进行硅胶柱层析和薄层层析的方法进行分离纯化,得到较纯的组分A;采用菌丝生长速率法对组分A进行抑菌活性实验。镜检结果显示组分A作用后的猕猴桃软腐病菌HGHM的菌丝断裂,原生质外渗形成空腔而使菌丝生长受到抑制;且计算出其对猕猴桃软腐病菌HGHM的EC50为63.95μg/m L。
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