靶向PDGF-A RNA干涉抑制增生性玻璃体视网膜病变中RPE细胞增殖的实验研究

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增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是孔源性视网膜脱离的并发症,也是造成视网膜脱离手术失败的常见原因。大多数学者认为PVR的发生始于细胞(主要是视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞)的增殖和移行,目前越来越多的研究表明,血小板源性生长因子(platelet-derived gowth factor,PDGF)对诱发视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelium,RPE)的增殖、移行,并最终导致PVR起到了重要作用。本实验针对PDGF-A基因,应用RNA干涉(RNAinterference,RNAi)技术,在PDGF-A基因的信使RNA(messenger RNA,mRNA)序列上寻找三个干涉靶点,分别通过化学合成的siRNA和小发夹RNA质粒表达载体转染人视网膜色素上皮细胞及大鼠玻璃体腔,经逆转录PCR(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白免疫印记技术(Western-blot)等方法来检测其对PDGF-A干涉效果,筛选有效干涉靶位点,并进一步研究PDGF-AA与视网膜色素上皮细胞及PVR的关系。本研究的创新性包括:(1)成功筛选出PDGF-A基因有效干涉靶点序列;(2)构建高效转录该靶序列的pGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒载体;(3)利用pGPU6/GFP/Neo-shRNA抑制RPE细胞的增殖和迁移,为最终预防和治疗PVR奠定实验基础。
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