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目的:研究吡柔比星(THP)和羟基喜树碱(HCPT)联合应用和单独应用对膀胱癌细胞抑制效果的差别;研究药物对癌细胞的的凋亡诱导作用;研究药物联合作用细胞后多药耐药基因的变化。
方法:分为THP组、HCPT组和两药联合组,同药物浓度下作用于T-24细胞,应用MTT法检测药物对细胞的抑制率,统计比较药物对T-24细胞抑制率的有无差别。同样的药物分组作用于T-24细胞,用电镜检测药物作用后细胞的凋亡的变化,TUNEL法(脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法)法检测药物对细胞的凋亡指数并统计比较。两药联合在低浓度下联合诱导培养T-24细胞一段时间后,应用免疫组化检测P-gp蛋白的表达,并用RT-PCR检测细胞中MDR-1基因的变化。
结果:MTT显示THP组抑制率高于HCPT组,两药联合组抑制率明显高于单药,电镜显示THP组和HCPT组以及联合组均出现了凋亡的形态改变化,但TUNEL显示两药联合组的凋亡指数明显高于单药组。免疫细胞化学显示,经THP+HCPT诱导培养后的细胞有大量P-gp蛋白的表达,RT-PCR同样显示在此细胞中MDR-1显著表达。
结论:THP较HCPT对膀胱肿瘤细胞有更大的抑制作用,而联合应用较单独应用能显著提高对膀胱肿瘤细胞的抑制率:THP和HCPT都具有诱导凋亡的作用,THP较HCPT诱导的凋亡指数更高,而两药联合能更有效的诱导凋亡:THP和HCPT联合应用也可引起耐药的产生,MDR-1基因参与耐药,提示可进一步联合MDR-1逆转剂以进一步提高抑制作用,减少多药耐药的发生。