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目的:观察三黄凝胶对大鼠耳廓复合痤疮模型皮损及病理形态的改变,为临床治疗和预防痤疮瘢痕的外用机制提供实验基础。方法:选取SPF级Wistar大鼠62只,雌性,按随机数字表法分为空白组、模型组。空白组10只,模型组52只。模型复制成功后,按随机数字表法将建模组分为模型组、阳性对照组(0.025%维A酸乳膏)、三黄凝胶治疗组(高、中、低),每组10只。除空白组外,在Kligman法基础上在大鼠右耳内侧面耳导管开口处每日涂100%油酸溶液1次,每次0.5-1mL,隔日于大鼠耳廓皮内注射痤疮丙酸杆菌菌液0.1ml,连续4周,建立大鼠耳廓复合痤疮模型。造模结束:若皮损表现为红、肿、脱屑等炎症性的反应,并可见毛囊孔扩大,有白色内容物堵塞于毛囊口,随机从模型组中抽出2只,切下右耳造模处耳廓组织HE染色,如见到角质层角化过度,毛囊口及漏斗部角栓堵塞,扩大呈壶状,表示动物模型较好地建立。造模成功后,分别经皮予0.025%维A酸乳膏、三黄凝胶高(0.08g/kg)、中(0.04g/kg)低(0.02g/kg)剂量,1次/d,连续28日;大鼠给药4w后,用10%的水合氯醛麻醉,心脏采血5ml,离心后取上清,-20℃保存,ELISA法检测血清中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF水平;颈椎脱臼法处死大鼠,取耳廓组织,用PBS(磷酸盐缓冲液)冲洗组织数次,部分固定于10%多聚甲醛供HE染色观察组织形态,其余于液氮中速冻后置于-80℃冰箱保存,用Western blot、RT-PCR分别检测IL-6、IL-10、CTGF、VEGF蛋白及基因的表达。结果:1肉眼观察:(1)空白组:大鼠耳廓组织柔软,无肿胀、脱屑,外观呈淡红色,可见毛细血管;毛囊无角化,无粉刺、脓疱、结节、囊肿,与正常组织相同。(2)模型组:表皮明显增厚,粗糙、大量脱屑,皮温高,肿胀明显,有丘疹状隆起,伴囊肿或脓疱产生(3)治疗4W后各组耳廓:与模型组相比较,各治疗组耳廓组织差异明显,其中阳性对照组(0.025%维A酸乳膏)耳廓组织柔软,颜色淡红,可见毛细血管,无粉刺、脓疱、结节、囊肿,接近空白组外观;三黄凝胶(高、中、低)组耳廓组织均有明显改善,尤以高、中剂量组为著,大鼠耳廓组织柔软,颜色淡红,可见毛细血管,无粉刺、脓疱、结节、囊肿,外观接近空白组外观。2病理形态学变化情况:(1)与空白组比较,模型组、三黄凝胶高、低剂量组表皮表皮明显增厚,皮下间质内大量腺体增生,纤维组织增生,角化过度或不全、细胞间水肿及淋巴细胞浸润仍然明显,0.025%维A酸乳膏组、三黄凝胶中剂量组接近正常;(2)与模型组病理形态对比,0.025%维A酸乳膏组、三黄凝胶高、中、低剂量组都有差异;(3)与0.025%维A酸乳膏组相比,三黄凝胶中剂量组、空白组组织形态相近,三黄凝胶高、低剂量组仍然存在病理形态改变。3 Elisa检测结果:耳组织中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF含量变化:(1)与空白组比较,模型组大鼠耳组织中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF含量显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠耳组织中IL-6、IL-10、VEGF含量均有不同程度的降低,其中尤以中药高、中剂量组以及阳性组大鼠耳组织中IL-6、IL-10、VEGF含量降低为显著,差异有统计学意义(P<0.05),中药低剂量组大鼠耳组织中IL-6、IL-10、VEGF含量降低虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与空白组比较,模型组大鼠耳组织中CTGF含量显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠耳组织中CTGF含量均有不同程度的降低,其中尤以阳性组、中药高剂量组大鼠耳组织中CTGF含量降低为显著,差异有统计学意义(P<0.05),中药中、低剂量组大鼠耳组织中CTGF含量降低虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。4 Western blot检测结果:耳组织中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF蛋白表达变化:(1)与空白组比较,模型组大鼠耳组织中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠耳组织中IL-6表达均有不同程度的降低,其中尤以中药高剂量组、阳性组大鼠耳组织中IL-6表达降低为显著,差异有统计学意义P<0.05),中药中、低剂量组大鼠耳组织中IL-6表达虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与模型组比较,给药组大鼠耳组织中IL-10、CTGF、VEGF表达均有不同程度的降低,其中尤以中药高、中剂量组以及阳性组大鼠耳组织中IL-10、CTGF、VEGF表达降低显著,差异有统计学意义(P<0.05),中药低剂量组大鼠耳组织中IL-10、CTGF、VEGF表达虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。5 RT-PCR检测结果:耳组织中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF基因表达变化:(1)与空白组比较,模型组大鼠耳组织中IL-6、IL-10、CTGF、VEGF基因表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠耳组织中IL-6基因表达均有不同程度的降低,其中尤以中药高剂量组、阳性组大鼠耳组织中IL-6基因表达降低为显著,差异有统计学意义(P<0.05),中药中、低剂量组大鼠耳组织中IL-6基因表达虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与空白组比较,模型组大鼠耳组织中IL-10、CTGF、VEGF基因表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠耳组织中IL-10、CTGF、VEGF基因表达均有不同程度的降低,其中尤以中药高、中剂量组以及阳性组大鼠耳组织中VEGF基因表达降低显著,差异有统计学意义(P<0.05),中药低剂量组大鼠耳组织中IL-10、CTGF、VEGF基因表达虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1 IL-6、IL-10、CTGF、VEGF在模型组的蛋白量、mRNA水平表达均高于空白组,提示其可能参与痤疮瘢痕的形成。2三黄凝胶可有效消退水肿、减轻组织间炎性浸润、防止脱屑、纠正表皮过度角化等病理组织变化,可下调IL-6、IL-10、CTGF、VEGF蛋白量及其mRNA的表达,且其中剂量与0.025%维A酸乳膏药效相当,呈一定的量效关系,为治疗和预防大鼠耳廓复合痤疮模型的有效作用机制。