纤维素是一类广泛存在于自然界中的碳水化合物，是一种重要的可再生资源，开发利用意义重大。康氏木霉（Trichodermakoningii）是自然界存在的分解纤维素的重要微生物之一，它能产生多种纤维素酶，满足降解纤维素的多种工艺要求。因此，这种丝状真菌持续受到研究人员的广泛关注。但是，直接用康氏木霉发酵产酶，不仅菌体生长周期长，产酶量低，工艺成本高，而且，为了研究不同纤维素酶的作用机理，还必须将每一种酶从康氏木霉的发酵产物中分离纯化，因此，限制了康氏木霉的研究和推广应用。　　 本文克隆康氏木霉的纤维二糖水解酶I基因(cbhI)，并在大肠杆菌宿主中异源表达，为构建单一纤维素分解酶的生产体系奠定基础。　　 首先，诱导康氏木霉产生纤维二糖水解酶，然后收集菌体，提取总DNA，以之为模板PCR扩增，测序并检索GeneBank。再提取总RNA并逆转录生成cDNA。设计引物，以cDNA为模板PCR扩增目标基因，克隆到T载体上进行DNA测序。将测序验证的片段克隆到表达载体pET-30a(+)上，构建重组质粒pET-30-cbhl，酶切和PCR验证后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS。重组子在30℃，180r/min条件下，培养至OD600=0.6，加入终浓度为0.4mmol/LIPTG继续诱导培养4小时。离心收集菌体，SDS-PAGE分析表明，特异性表达蛋白带分子量约67KDa，与预测目的蛋白大小一致。诱导表达后的菌体经超声波处理，对CMC-Na的酶活力为1.54U/mL。　　 本课题还构建了毕赤酵母的表达载体pPICZaA—cbhI，重组质粒大小约5kb，与预期一致；PCR扩增、酶切、测序等方法验证了重组质粒携带完整的纤维二糖水解酶I基因(cbhI)。　　 纤维水解二糖酶基因(cbhl)在E.coli的克隆和成功表达，以及毕赤酵母的表达载体pPICZoA-cbhI的成功构建，为利用基因工程方法大量制备和研究纤维素水解关键酶——纤维二糖水解酶，奠定了基础。