该文介绍了利用Mu转座重组技术对该课题组分离的、能抑制病原真菌生长的地衣芽孢杆菌NKYM3菌株进行的抑真菌作用及相关基因的研究,特别探讨了Mu转座复合物电转化地衣芽孢杆菌的最佳条件,为地衣芽孢杆菌抑真菌物质相关基因的组织结构、生物功能和基因调控的研究奠定基础.Mu转座复合物是由人工Mu转座子(携带一个卡那霉素抗性基因),在体外与四聚体MuA转座酶形成,然后,电转化地衣芽孢杆菌的受体细胞,引起插入位点基因的失活和相应表型的改变,经重组抗性和表型筛选,可以进一步探索未知的地衣芽孢杆菌抑真菌物质相关基因.该研究建立了完整的地衣芽孢杆菌抑真菌的检测方法,确立了指示真菌,用蛋白酶K消化地衣芽孢杆菌上清液,证明了抑真菌物质中含有蛋白质.探讨了培养基中添加甘氨酸浓度、细胞的生长状态、电击电压、,质粒的质量浓度对地衣芽孢杆菌电转化效率的影响,优化了地衣芽孢杆菌的最适电转化条件:用含0.34﹪甘氨酸的M9-YE液体培养基于37℃培养细胞至对数早期(OD<,600>=0.5左右),制备浓度为10<11>个细胞/毫升的感受态细胞,电击电压为1.8kv,涂布于含0.25M蔗糖、50μg/ml卡那霉素的固体M9-YE培养基上,得到6.8×10<5>CFU/μgDNA(带有卡那霉素抗性标记的pNL501质粒)的高转化效率,并在国际上首次成功的将Mu转座复合物电转化入地衣芽孢杆菌中,用1μl 1:8稀释的转座复合物与50μl感受态细胞混匀,电击电压为1.8kv,得到的转化效率为3×10<2>CFU/μg DNA.这为我们进一步研究地衣芽孢杆菌的抑真菌物质相关基因奠定了基础.对抑真菌效果增强的Mu转座复合物转化子03001进行基因克隆和DNA序列分析,得到编码地衣芽孢杆菌NKYM3菌株核糖体蛋白L33的rpmG基因,该基因是地衣芽孢杆菌NKYM3菌株抑真菌物质分泌及芽孢形成的相关基因.这不仅为我们进一步研究地衣芽孢杆菌的功能基因组奠定了基础,同时,也为其他革兰氏阳性细菌的功能基因组研究开拓了新路.