论文部分内容阅读
目的癌基因的激活与抑癌基因的失活在胃腺癌的发病机制中扮演重要角色。越来越多的研究发现microRNA可以通过调控其靶基因的表达进而发挥癌基因或抑癌基因的作用。但对于microRNA在胃腺癌发生发展过程中起到的作用我们还知之甚少。本研究旨在筛选出胃腺癌组织中差异表达的microRNA,并对部分差异表达microRNA在胃腺癌发生发展中所发挥的作用进行探讨。方法1对来源于临床的4对胃腺癌组织及癌旁正常组织中提取的RNA进行基于microRNA克隆扩增的microRNA芯片实验。对芯片实验结果进行聚类分析和比值分析,筛选出在胃腺癌组织中差异表达的microRNA。运用半定量PCR的方法对芯片实验筛选的部分结果进行验证。2运用MTT及平板克隆形成实验检测部分差异表达microRNA对于胃腺癌细胞MGC803增殖能力的影响。3运用生物信息学方法预测候选microRNA的靶基因,并使用荧光报告系统实验对预测靶基因进行实验验证。结果1 microRNA芯片结果的聚类分析显示,胃腺癌组织与癌旁正常组织存在microRNA表达的差异性；比值分析筛选出在胃腺癌组织中上调的microRNA 13个,下调的microRNA9个。半定量PCR对芯片筛选出的部分差异表达的microRNA (3个上调microRNA:miR-23a, miR-27a, miR-191;3个下调的microRNA:miR-181b, miR-182, miR-210)进行了验证。2选取在胃腺癌组织中下调的miR-181b, miR-182,观察其对胃腺癌细胞MGC803增殖能力的影响。结果显示,miR-181b或／和miR-182表达升高可使MTT中细胞活性降低,平板克隆实验中克隆形成数减少；而miR-181b或／和miR-182表达减低,则可使MTT中细胞活性增强,平板克隆实验中克隆形成数增加。3为进一步研究：miR-181b, miR-182对MGC803增殖能力影响的作用机制,使用生物信息学方法对其靶基因进行了预测,结果显示两者存在公共靶基因即癌基因CREBl。并使用荧光报告载体系统对预测靶基因进行验证,结果显示CREB13’UTR存在niR-181b, miR-182直接作用的靶位点。结论本研究筛选了在胃腺癌组织中差异表达的microRNA,发现了在胃腺癌组织中下调的miR-181b, miR-182可通过抑制其靶基因CREB1的表达进而抑制胃腺癌细胞的增殖,发挥了抑癌基因的作用。胃腺癌组织中差异表达的microRNA及其作用机制的研究对于加深胃腺癌发病机制的理解、以及对于临床诊断、肿瘤标志物的确定、肿瘤防治方面都具有潜在的应用价值。