【摘 要】
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代表性差异分析技术是一种以PCR反应为基础的消减杂交方法,其最初是用于对基因组序列进行比较,随后扩展至对差异表达的cDNA进行比较和克隆.该方法不需对单链和双链cDNA进行物
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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代表性差异分析技术<[12]>是一种以PCR反应为基础的消减杂交方法,其最初是用于对基因组序列进行比较,随后扩展至对差异表达的cDNA进行比较和克隆<[13]>.该方法不需对单链和双链cDNA进行物理分离,经过筛选和差异性富集大大提高了肖减杂交的效率.RDA虽然是一种改良的消减杂交方法,但对于低丰度转录子的筛选效率仍很低,而且需进行多次杂交和PCR,操作繁琐.SSH方法具有快速、简便易行、所需mRNA量较少(1~2μg)以及假阳性率低、重复性好等优点,近年来成为分离羞基因的有效工具.<[10-12] >.通过SSH方法可获得50-1000bp的差异片段克隆,经过筛选后,样品之间羞的片段得到富集,对那些在细胞或组织中普遍表达的看家基因则被筛去,提高了特异基因的筛出率,某些稀少丰度表达的mRNA可望被检测出.该课题研究内容如下:一、胃癌组织和正常组织的消减cDNA文库的构建;二、基因芯片技术对文库中的克隆进行筛选;三、测序及生物信息学分析.
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