【摘 要】
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为了能够揭示出草鱼出血病病毒基因组以及为水生呼肠孤病毒提供进一步的数据,在几乎没有任何序列信息可以参照的情况下,该文通过在dsRNA节段两端加上人工接头,再用相关引物进
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为了能够揭示出草鱼出血病病毒基因组以及为水生呼肠孤病毒提供进一步的数据,在几乎没有任何序列信息可以参照的情况下,该文通过在dsRNA节段两端加上人工接头,再用相关引物进行单引物扩增的方法构建了草鱼出血病病毒基因组的全长cDNA文库.该文通过Southern印迹,Northern印迹以及DNA序列分析等途径证实了克隆的草鱼出血病病毒全长cDNA的正确性.为了进一步识别该病毒基因组的编码蛋白,该文将其基因组节段M6、S8、S10的ORF从其克隆载体上扩增出来,插入pET-28a载体上的克隆位点,在大肠杆菌中进行了表达.通过对基因组各节段的末端序列分析,该文发现了该病毒特有的末端保守序列5′GUUAUU------CAUC 3′,另外,在末端保守序列附近,各个基因节段又拥有节段特异的倒转重复序列.经序列分析,草鱼出血病病毒缺损性干扰颗粒(defective interfering, DI)的dsRNA组分,Northern印迹显示它们在基因组中确实存在.
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