白术多糖对牛羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响

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白术多糖是中药白术发挥生物学活性作用的重要成分,对细胞的生长、增殖及分化具有明显的促进作用,为不断提高卵母细胞体外成熟率、受精卵发育能力和优化培养体系,本研究在体外培养液中添加白术多糖,研究白术多糖对牛、羊卵母细胞的体外成熟及受精卵发育的影响。试验通过从屠宰场收集的废弃牛、羊卵巢,比较抽吸法和挖卵法对获得的卵母细胞数量及质量的影响;取A/B级卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加10、50、100、150、200μg/mL的白术多糖溶液,检测白术多糖的最适添加浓度,在此基础上,对卵母细胞进行高温处理,研究白术多糖对卵母细胞热应激损害的保护作用;对获得的成熟卵母细胞进行体外受精,筛选体外基础培养液及共培养体细胞种类,在受精卵体外培养液中,添加上述浓度的白术多糖共同孵育培养,检测24h和48h的卵裂率,试验结果如下:1、不同的集卵方法对卵母细胞的获得数量和质量有很大影响,使用特制挖卵刀获得的卵母细胞数及A/B级卵母细胞率与抽吸法相比,差异显著(P<0.05),其中,羊卵巢采用挖卵法能获得更多的A/B级卵母细胞。2、在体外成熟培养液中添加不同浓度的白术多糖溶液,对牛、羊卵母细胞进行培养,结果显示:牛、羊卵母细胞对高剂量(150μg/mL、200μg/mL)白术多糖均表现出发育停滞现象,卵母细胞的成熟率显著下降,50μg/mL以下的低剂量对牛、羊卵母细胞发育有一定的促进作用,其中牛卵母细胞使用50μg/mL添加剂量,卵母细胞的成熟率最高,差异显著(P<0.05);羊卵母细胞使用10μg/mL添加剂量效果最好。在卵母细胞受到热应激刺激时,白术多糖对牛卵母细胞的保护作用强于羊卵母细胞。3、通过对培养液及共培养细胞的筛选,得出受精卵体外培养液选用ACM基础培养液,MEF细胞作为共培养细胞时,对羊受精卵发育的作用效果最好;培养液中添加白术多糖,可明显提高24h的受精卵卵裂率,对48h的卵裂率无明显作用,表明白术多糖可促进羊受精卵的发育速度,利于早期胚胎的成活。综上所述,白术多糖在低剂量(10μg/mL、50μg/mL)的添加浓度时,能够显著提高牛、羊卵母细胞的体外成熟率,对热应激状态下的牛卵母细胞有明显的保护作用,受精卵体外培养液中添加中、低剂量(10-100μg/mL)的白术多糖可显著提高羊受精卵的24h卵裂率。
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