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目的：本文研制了一种新颖的剂型PVP包衣去甲斑蝥素-壳聚糖纳米粒(polyvinylpyrrolidone-coatednorcantharidinchitosannanoparticles,PVP-NCTD-NPs),以提高去甲斑蝥素(NCTD)的生物利用度以及降低其肾毒性;同时建立高效液相色谱(HPLC)法和高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定生物样品中NCTD浓度，旨在研究PVP-NCTD-NPs在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，为其进一步研究与开发提供科学依据。
方法：(1)等温吸附法考察载体壳聚糖(CS)浓度、NCTD浓度以及pH等因素对包衣纳米粒载药特性的影响，推断其吸附规律;原子力显微镜(AFM)验证纳米粒形态学特征。(2)正交设计优化PVP-NCTD-NPs的制备;动态激光散射法测定平均粒径与粒度分布;红外光谱(FT-IR)、X-射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)对其进行表征;并考察纳米粒在体外不同pH介质中的释药性质。(3)大鼠血液中NCTD含量LC-MS/MS测定方法的建立及药代动力学研究:以高氯酸和甲醇双重沉淀生物样品中蛋白质，多重反应离子（MRM）模式测定大鼠尾静脉注射和口服PVP-NCTD-NPs与原药NCTD后血药浓度，3P97软件计算药动学参数。(4)小鼠血液及各组织中NCTD含量LC-MS/MS测定方法的建立及组织分布研究:以NCTD为参比制剂，考察小鼠口服给予PVP-NCTD-NPs后药物在各组织脏器中的分布，以靶向效率（Te）、相对靶向效率（RTe）和靶向指数(TI)为评价参数，分析其对各组织的靶向性。(5)大鼠粪便及尿液中NCTD含量LC-MS/MS测定方法的建立及体内代谢研究:大鼠口服给予PVP-NCTD-NPs后，于不同时间段以MRM模式检测尿样及粪样中NCTD含量，计算药物累积排泄率;并根据代谢产物的相对分子质量及质谱行为，推断其结构。(6)大鼠肝微粒体中NCTD含量LC-MS/MS测定方法的建立及体外酶促动力学研究:钙离子沉淀法制备大鼠肝微粒体，Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度;考察孵育时间、酶浓度和底物浓度对药物代谢速率的影响，并根据Lineweave-Brurk双倒数曲线，计算酶促动力学参数。
结果：(1)PVP-NCTD-NPs的吸附更加符合Freundlich经验公式，y=0.698x+4.012，相关系数r=0.998，证实药物主要以包裹的形式存在于纳米粒骨架中;AFM二维图显示:2.5％PVP组的纳米粒形态均一，包裹现象明显，而过量的PVP会降低药物的包封率。(2)采用最佳处方制备的PVP-NCTD-NPs平均粒径为(140.03±6.23)nm，包封率为(56.33±1.41)％，载药量为(8.38±0.56)％;由SEM图和AFM三维图可见纳米粒呈球形，颗粒饱满。相比于原料药组，PVP-NCTD-NPs在0.1mol·L-1HC1和PBS(pH=5.7)两种介质中释放更加缓慢，累积释放率达85％。(3)大鼠血液中NCTD含量LC-MS/MS测定方法的回收率均大于95％，日内、日间精密度均小于10％，证实该方法符合生物样品分析的要求。经3P97软件拟合，两种制剂的药代动力学过程均符合二室模型。与NCTD相比，PVP-NCTD-NPs的AUC显著增大(P＜0.05），CL显著降低(P＜0.05），静脉注射组的相对生物利用度为325.5％，口服组的相对生物利用度为173.3％。(4)小鼠组织分布研究结果表明，PVP-NCTD-NPs在体内药物浓度分布趋势为胆囊＞肾脏＞肝脏＞其他脏器，而NCTD为肺脏＞心脏＞肾脏＞其他脏器;纳米粒组药物以原药自尿中排出的量是原料药组的1.37倍，自胆汁和（或）粪便排出的是32.21倍.(5)大鼠排泄研究表明，口服PVP-NCTD-NPs24h后，在尿液及粪便中NCTD累积排泄率分别为17.80±3.32％和4.51±0.89％，大鼠尿样中共检测到八种代谢产物，而粪便中只有两种。(6)大鼠肝微粒体中代谢酶动力学显示，原料药组的肝内清除率(CLint)要大于PVP-NCTD-NPs组(P＜0.05），而两者最大反应速率（Vmax）无明显差异。
结论：本LC-MS/MS方法灵敏、准确、选择性高，适用于生物样品中NCTD浓度检测及药代动力学研究。PVP-NCTD-NPs可促进药物的吸收，延缓消除速率，显著提高NCTD的生物利用度，并且具有良好的肝靶向性。肾脏和肝胆系统为主要排泄途径，并且包衣纳米粒明显增加药物自胆汁排出的量。研究结果显示，这种新型包衣纳米药物输送系统具有良好的开发应用前景。