溴吡斯的明(Pyridostigmine bromide,PB)是一种胆碱酯酶抑制剂,通过抑制胆碱酯酶的活性,使胆碱能神经末梢释放的乙酰胆碱破坏减少,突触间隙中乙酰胆碱积聚,出现毒覃碱样和烟碱样胆碱受体兴奋作用,从而提高胃肠道、支气管平滑肌和全身骨骼肌的肌张力。临床上用于改善重症肌无力的症状,也适用于尿潴留、手术后腹胀气及室上型心动过速等。目前国内市售剂型只有普通片剂。由于PB体内半衰期2.6~3.5h,用药后半小时内起效,但消除较快虽能改善症状,但作用时间短,每隔4~6小时即需给药一次。由于用药频率高,血药浓度波动程度大,由此引起的肌肉震颤等副作用明显。本课题拟研制每12小时给药一次的溴吡斯的明缓释微丸,适当降低体内血药峰浓度,提高血药谷浓度,既能减少患者给药次数,又能降低由于血药浓度的波动引起的不良反应。目的:制备每12小时给药一次的溴吡斯的明缓释微丸,减缓由于血药浓度过高引起的不良反应,提高患者用药依从性,且为溴吡斯的明新剂型的开发提供依据。方法:1、选用乙基纤维素为黏合剂,乙醇为溶剂,对空白丸芯上药,制备素丸;选用缓释成膜材料乙基纤维素为阻滞剂,邻苯二甲酸二乙酯为增塑剂,聚乙二醇(PEG)为致孔剂,乙醇为包衣溶媒,对素丸进行包衣,制备膜控型缓释微丸。2、丸芯上药与缓释包衣均采用流化床底喷包衣技术,以缓释微丸的释放度为指标,通过改变包衣流速,进风量,进风温度这些参数,初步筛选出流化床包衣的工艺条件。3、预实验后,初步确定处方与工艺参数,以释放度为指标,对缓释包衣膜的组分进行单因素考察,主要考察了包衣液中增塑剂用量、致孔剂用量、包衣增重对释放度的影响;单因素优化后,以试验制剂释放度与参比数据的相似因子(f2)为考察指标,通过均匀设计,确定包衣的最佳处方。对优化处方的释放度进行模型拟合。4、建立PB缓释微丸的含量测定方法。5、建立释放度测定法,并以含量,释放度,外观性状,有关物质为指标,考察了高温,高湿,光照对PB缓释微丸稳定性的影响。6、建立高效液相色谱一质谱联用法,用于PB缓释微丸在大鼠体内的血药浓度的测定。选用SD大鼠作实验动物,以PB素丸为对照组,PB缓释微丸为试验组,口服给药,在不同时间点取血,血浆样品处理后,用LC-MS法进行测定。通过DAS软件,进行药动学数据分析。结果:1.处方筛选结果;处方组成为PB,乙基纤维素,邻苯二甲酸二乙酯,PEG6000,该处方所制备的微丸外观,圆整度等均较好。2.工艺研究结果;当喷嘴直径为0.5mm,进风量为22±1 m3·h-1,进风温度为50±2℃,雾化压力为0.7 Mpa,包衣流速为1.5ml·min-1,物料温度为36℃时,无微丸粘黏,静电等现象产生,微丸圆整度较好。3.处方优化结果;单因素结果表明,随着增塑剂用量,包衣增重的增加,微丸释药速率明显减缓;随着致孔剂用量的增加,微丸释药速率加快。均匀设计优化结果表明,当PEG为12.8%,邻苯二甲酸二乙酯为22.7%,包衣增重为21.6%时,试验制剂释放度与参比数据的相似因子(f2)为85.7,释放行为无明显差异。4.含量及释放度测定方法学研究结果;PB的最大吸收波长为269nm,空白辅料在269nm处无吸收;线性范围为12.66~44.31μg·ml-1;精密度良好;PB在24h内保持稳定;该分析方法加样回收率在96.75%~101.63%之间。5.初步质量及稳定性研究结果;释放度测定,选用桨法,水为溶出介质,搅拌桨速为50 rpm。模型拟合结果表明,一级动力学模型拟合较好,相关系数r为0.9976,药物的释放通过不溶性的膜扩散完成。影响因素试验表明,1高温及光照时,微丸的释放度,外观,含量及有关物质无明显变化;2高湿试验表明,该微丸外观粘黏,含量降低,释放度及有关物质增加。即该制剂对湿度极不稳定,对药包材料要求较高。6.体内药动学研究结果,建立了大鼠体内PB浓度测定方法,LC-MS/MS液相与质谱条件,PB的质荷比:m/z 181.0→m/z 72.1;PB血浆样品线性范围为7.80~250.00ng/ml;内源性物质不干扰PB的测定;精密度良好,方法回收率,提取回收率符合要求;血浆样品冻融3次,及在24h内均保持稳定;基质效应可忽略。药动学参数如下:缓释微丸AUC0-t:714±333.55 ug/L*h,Cmax:155.27±35.11ug/L,Tmax:2.1h,t1/2:4.42h;素丸AUC0-t:507.55±181.19 ug/L*h,Cmax:125.94±47.32ug/L,Tmax:1.3h,t1/2:2.39h。结论:1、PB缓释微丸的释放模型符合一级动力学模型,即药物的释放通过不溶性的膜扩散完成,符合膜控释微丸释药机理2、PB缓释微丸对湿度敏感,在高湿条件下不稳定,需在干燥条件下贮存。3、该缓释微丸在大鼠体内能迅速起效,与素丸相比,血药浓度下降缓慢,有一定的缓释效果。