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[目的]：不同基因型的HBV可能有不同的生物学特性,病毒基因型可能与长期感染的病程进展及对干扰素的治疗反应有关。目前我国HBV全长序列较少,本研究通过建立一种高效快速的HBV全基因组克隆方法,进行病毒基因序列测定并获取一定数量的HBV全长序列基因,为实现HBV结构和功能蛋白特异性原核表达做准备,利用序列分析软件对得到的序列进行基本的型别分析,分析不同基因型之间的区别及联系,从而丰富我国的HBV全长基因库,为HBV基因特点与HBV变异研究、HBV药物及疫苗研究以及乙型肝炎的个体化治疗提供参考依据。[方法]：收集100份HBV-DNA阳性的慢性HBV感染者血清标本,提取HBV全基因组,从Genbank中下载100条HBV全长序列作为引物设计参考,设计合适的特异性引物进行扩增,用一步法聚合酶链式反应(PCR)得至HBV PCR产物,与合适的载体进行快速连接,通过蓝白斑筛选挑出正确的单克隆进行测序得到HBV全长序列,利用序列分析软件对所得到的全长序列进行基本的分析。[结果]：建立了一种区别于传统TA克隆的连接方法,利用两对引物可直接将HBV全长序列(插入片段)与pMD18T(T载体)进行连接,提高了连接效率与成功率；从乙型肝炎患者血清中提取了HBV基因组DNA,经PCR扩增得到预期大小的全长基因；构建重组pMD18T-HBV载体,经酶切证实具有与日标片段长度相符的插入片段：在已经向NCBI提交的51株HBV全长序列,测序结果分析显示,B基因型18例(35.29%),C基因型33例(64.70%),没有B+C型,发现YMDD耐药株3例。[结论]：利用高效的克隆连接方法,可以大大简化插入片段与载体的连接步骤,提高效率与成功率。克隆了HBV DNA中国株的全基因序列,可以作为研究中HBV流行株的参考序列。对完成克隆的51株HBV全长序列分析,发现全部为B型与C型,未发现其他基因型。由于样本量较小,且人口流动性较大,无法对地域方面的流行病学特征做进一步的分析。