湖羊作为我国特有的高繁殖力品种之一,具有很高的经济价值。繁殖力是影响绵羊养殖效率的重要因素之一,随着母体的衰老,绵羊的繁殖力不断降低,而卵母细胞老化是老龄绵羊繁殖能力降低的主要因素。本研究比较青年母羊与老年母羊成熟卵母细胞,通过透射电镜来比较青年和老年湖羊的卵母细胞超微结构,并利用单细胞转录组测序技术（Single Cell RNA Sequencing,sc RNA-Seq）筛选因衰老导致卵母细胞老化的关键基因,以期从分子水平研究湖羊卵母细胞老化的调控机制,本研究结果如下:1)青年湖羊卵母细胞透明带呈疏松的纤维状结构,边缘清晰明显,线粒体分布较均匀,数量较多;微绒毛短小且倒伏于卵母细胞质膜表面,卵周隙窄,皮质颗粒均匀分布在皮质区;老年湖羊卵母细胞透明带边缘虚化,排列紧密,胞质内线粒体数量变少,微绒毛分布不均匀,数量变少,卵周隙变宽,皮质颗粒迁移并聚集,在胞质区可见。这些结果说明,卵母细胞老化会引起其超微结构发生改变。2)sc RNA-Seq测序可知,原始数据Q20＞95%、Q30＞85%,将测序原始序列定位到绵羊参考基因组上比对发现,其占比在80%以上。青年和老年湖羊卵母细胞差异表达基因有614个,相较于青年湖羊,老年湖羊表达上调的基因有229个,表达下调的基因有385个。其中与线粒体膜电位调节,抗氧化应激、脂质抗氧化等功能有关的基因SEMA3D、Nr CAM、PKD1、PLA2G4D、PLA2G6、PYCR 1在老年湖羊卵母细胞中表达下调,这些可能是参与卵母细胞老化的关键基因。3)GO富集分析发现,差异表达基因主要在膜、核染色质、囊泡、信号受体活性功能、ATP酶活性、细胞粘附、细胞钙离子同源性、磷脂酰胆碱分解过程的调节等生物学过程中发挥作用;KEGG通路揭示,差异表达基因显著富集到细胞生长与死亡、发育、衰老、信号转导、胆固醇代谢、ABC转运体、亚油酸代谢、代谢通路、视黄醇代谢等通路,这些显著富集的通路可能参与湖羊卵母细胞老化过程。4)综上所述,本研究从卵母细胞形态学和基因表达水平上分析了青年湖羊与老年湖羊卵母细胞的差异,并结合生物信息学分析因衰老导致的卵母细胞老化的有关的基因和参与的信号通路,为进一步解析老年湖羊卵母细胞老化的分子机制提供了研究基础。