三聚氰胺胶体金免疫层析方法的建立

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三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环化合物。它本是一种重要的化工原料,被广泛用于木材、塑料、涂料、造纸等行业,由于其含氮量较高,近年来有不法商贩将其作为“蛋白精”添加到生鲜乳、饲料甚至婴幼儿食品中以提高产品的蛋白质含量。有报道指出三聚氰胺的毒性轻微,但若长期摄入,尤其是婴幼儿,会造成生殖、泌尿系统的损害,膀胱、肾部结石,并可进一步诱发膀胱癌。国内已制订了包括液态乳在内的多种基质的三聚氰胺的检测方法,但这些方法均需先进检测设备、前处理步骤繁琐、耗时较长,不能满足大批量乳品现场快速筛查需要。因此开发一种三聚氰胺快速检测方法具有重要意义。本研究建立的三聚氰胺胶体金试纸条准确度好、灵敏度高、稳定性强,适用于大批量乳品的现场快速检测。本研究内容主要包括以下几部分:1).三聚氰胺人工抗原的制备本研究通过三种途径对三聚氰胺结构进行修饰,合成三种不同结构的三聚氰胺衍生物作为半抗原,分别将其与牛血清白蛋白连接作为人工抗原,与卵清蛋白连接作为包被抗原。2).抗三聚氰胺单克隆抗体的制备本研究采用有限稀释法制备抗三聚氰胺单克隆抗体,获得了能够持续分泌抗三聚氰胺单克隆抗体10G5-E9-A1细胞株,采用辛酸-饱和硫酸铵法从腹水中纯化抗三聚氰胺单克隆抗体,抗体对三聚氰胺具有较高特异性。3).胶体金试纸条的研制和性能评价本研究对胶金垫、样品垫、NC膜、吸水纸进行了筛选,对抗体标记量、喷金量、检测抗原量等工艺参数进行了优化,对试纸条的性能参数做出了评价。实验结果表明:该试纸条检测时间为10min,检测限为10μg/L,假阳性率及假阴性率均为0,预计保质期达14个月。
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