论文部分内容阅读
高平黄梨是山西著名特产,高平素有梨乡之称,距今已有1 500年的栽培历史,其个大、味浓、香甜适口,味道鲜美,各种维生素、矿物质含量高,水分大、耐贮运且含糖量很高。随着梨汁加工产业的发展,产生了越来越多的梨渣,梨渣中含有丰富的多糖,而多糖是生物体重要的生物活性物质,具有调节免疫力、抗氧化、抗肿瘤、降血脂降血糖等作用,因此梨渣可作为提取多糖的主要来源。本文以山西高平黄梨渣为原料,利用现代提取分离纯化技术,对黄梨渣多糖的提取工艺、分离纯化、相对分子质量、单糖组成及其基本结构进行初步分析,并对其体内免疫调节作用和抗氧化能力进行评价,为今后黄梨渣的进一步开发和利用提供了参考价值。研究结果如下:（1）利用水浴醇沉法和超声辅助法提取黄梨渣多糖,以多糖提取量为指标,分别进行单因素试验和响应面优化试验。水浴醇沉法得到最优条件为:料液比1:35,温度67℃,时间3.7h,在此条件下进行三次重复实验后测多糖提取量的平均值为56.15mg/g;超声辅助法得到最优条件为:料液比1:13,超声时间60min,超声功率132W,超声温度57℃,在此条件下进行三次重复实验后测多糖提取量的平均值为62.38mg/g,优于水浴醇沉法,且超声辅助提取法具有省时、高效、便于操作等优点,故综合考虑选取超声辅助法来提取黄梨渣多糖。（2）粗多糖经过酶法和Sevag法联合除蛋白,蛋白脱除率为75%且多糖损失率仅为24.71%,可达到简化操作工艺、省时、最大限度去除蛋白质的同时保证多糖得率的目的;H2O2法脱色率最高,可达78.56%,且多糖损失率最低,脱色效果好,操作简单;脱蛋白、脱色、透析后的梨渣多糖经DEAE-52纤维素柱层析分离得到3个峰,表明梨渣多糖由3种不同组成的组分构成,由于前两种成分含量较少,故后续只对LPB-C进行研究;多糖LPB-C经过Sephadex G-100凝胶柱流出的曲线呈单一对称峰,紫外光谱结果显示多糖的特征吸收峰出现在225 nm波长处,260 nm和280 nm波长处没有出现吸收峰,表明经DEAE-52纤维素柱层析纯化后的多糖不含核酸和蛋白质等杂质,且LPB-C经冻融离心后没有沉淀出现,三种方法都证明LPB-C为相对分子质量分布单一的组分,是一种较纯的多糖。（3）经测定,分离纯化后分子质量分布比较均一的梨渣多糖LPB-C的特性黏度[η]为1.11 cm3/g,根据Mark-Houwink公式求得其黏均分子质量为8.47×104 g/mol;将黄梨渣多糖衍生物的超高效液相色谱图与混合标准单糖进行对比,根据其出峰时间可以确定黄梨渣多糖中含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖和木糖,根据峰面积计算出4种单糖的物质的量比为3.3:2.3:10.6:23.2;LPB-C的红外光谱图可以看出其具有多糖的特征吸收峰,可推测其是一种含有β糖苷键的吡喃型多糖。（4）建模成功后,给小鼠连续灌胃给药15天,发现小鼠的胸腺指数和脾脏指数显著升高;炭廓清能力随着多糖浓度的升高而逐渐增强,其中高剂量组小鼠吞噬指数的增加最为显著;小鼠耳垂肿胀率明显上升,说明黄梨渣多糖可使小鼠受抑制的DTH反应恢复,对细胞免疫功能具有促进作用;经治疗的小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4三种细胞因子的分泌量均显著增加,能够有效地杀伤和抑制肿瘤细胞、抑制病毒复制、调节多种造血细胞;同时小鼠肝脏、心脏和肾脏三种组织器官中SOD、CAT、GSH-PX活力显著增加,而脂质过氧化物MDA水平降低,说明黄梨渣多糖可以提高免疫抑制小鼠的抗氧化能力。