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目的: 研究通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默胃癌MGC-803细胞的WNT3基因,检测WNT3基因对胃癌MGC-803细胞及其生物学行为的影响。 方法: 实验设计合成了4组WNT3 siRNA干扰质粒(L337、L714、L981、L1188),通过脂质体将干扰质粒转染到胃癌MGC-803细胞,沉默WNT3基因,在转染24h和48h后,分别利用实时定量PCR(Real-time quantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)检测WNT3mRNA及蛋白的表达情况;采用Cell Counting Kit(CCK-8)法检测转染后0h、24、48h和72h胃癌MGC-803细胞增殖活性的变化;采用粘附实验检测转染后48h人胃癌MGC-803细胞的粘附率变化情况。用Transwell及划痕实验分析转染后48h人胃癌MGC-803细胞侵袭、迁移的影响;流式细胞仪检测转染后48h胃癌MGC-803细胞周期和细胞凋亡变化情况。 结果: siRNA干扰质粒成功转染人胃癌MGC-803细胞中,转染效率达80%,在转染24h和48h后,分别进行实时定量RT-PCR检测WNT3 mRNA的表达水平和Western blotting检测蛋白表达水平。 结果显示: 1、siRNA干扰质粒转染胃癌MGC-803细胞24h和48h后,W714与W1188干扰组MGC-803细胞中WNT3 mRNA和蛋白质表达水平降低,与对照组比,差异有统计学意义。 2、选取L714与L1188干扰组进行后续的实验。CCK-8结果显示,干扰组细胞的增殖明显受到抑制;粘附实验结果显示,干扰组细胞的粘附水平显著升高;Transwell及划痕结果显示,干扰组细胞的侵袭水平和迁移能力降低;流式细胞仪结果显示胃癌MGC-803细胞的凋亡水平显著升高,而且干扰组细胞的细胞周期,S期比例升高,G1期比例降低,发生了S期阻滞现象。 结论: 本研究结果显示沉默WNT3基因后人胃癌MGC-803细胞的多种生物学行为均有改变:WNT3 siRNA干扰胃癌MGC-803细胞基因沉默效果显著,降低了胃癌MGC-803细胞的增殖速率,提高了胃癌MGC-803细胞的粘附率能力,促进了胃癌MGC-803细胞的凋亡,影响了胃癌MGC-803细胞的细胞周期,S 期比例升高,G1期比例降低,减弱了胃癌MGC-803细胞的侵袭和迁移力WNT3基因沉默。研究结果显示,WNT3基因可能成为一个新的抗肿瘤作用靶点。 创新点: 本课题首次探讨胃癌细胞MGC-803 WNT3基因沉默后,对肿瘤细胞粘附率、增殖力、侵袭力、迁移力、细胞凋亡及周期等生物学行为的影响。