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多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P.multocida）属于牛群常见机会致病菌，现以A、B型两种血清型在国内流行，致使我国养牛业遭受巨大的经济损失。A型P.multocida在牛群经长途运输、寒冷、拥挤等应激时致病，多为并发或继发感染；B型 P.multocida可诱发致死性败血症，多急性发病，病死率高。为防控牛源A、B型P.multocida在国内流行，扼制巴氏杆菌病的传播扩散，减少因其遭受的经济损失，本研究拟研制A、B型P.multocida二价灭活疫苗，并进行疫苗效力评价，为高效防控牛巴氏杆菌病奠定理论基础和实践依据。主要研究内容及结果如下： 1.牛A型及B型多杀性巴氏杆菌毒力评价 本实验室前期已筛选出A型P.multocida灭活疫苗制苗株Pm-HG，现就实验室保存的三株B型P.multocida强毒株Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47进行毒力以及免疫原性评价。攻毒试验取168只SPF小鼠，分为4个试验组，对应腹腔攻毒Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG，每个试验组再分为5个剂量组（8只/组），另设一组为对照组。结果显示，Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG菌株的LD50分别为11.1、22.3、21.3、3.1CFU；Pm-C45菌株攻毒后病理变化严重，组织损伤评分相对较高，可知Pm-C45毒力相对较强。 2.牛A型及B型多杀性巴氏杆菌单价苗免疫原性的评价 分别研制 Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG菌株的油乳佐剂灭活疫苗。取208只SPF小鼠分为5个试验组，分别颈背部免疫接种上述4种灭活苗，一免后间隔两周二免，第5试验组为对照组不免疫，每个试验组再分为4个攻毒组（8只/组），分别腹腔感染Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG，另设一组为空白组。间接ELISA监测小鼠抗体水平，记录攻毒后两周小鼠死亡情况并进行病理学分析。结果显示， Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG灭活苗可诱导小鼠产生的最高血清抗体效价分别为1：512000、1：25600、1：3200、1：12800；Pm-C45、Pm-C46、Pm-HG灭活苗对同源菌攻毒保护率分别为56.2％、33.3%、12.5%，Pm-C47对照组攻毒未出现死亡无法统计保护率；Pm-C45、Pm-C46灭活苗对异源菌Pm-HG攻毒交叉保护率分别为25%、12.5%；免疫后小鼠同源菌攻毒病理损伤评分，Pm-C45组小鼠评分降低更多；可知Pm-C45免疫原性相对较好。 3.牛A、B型多杀性巴氏杆菌二价灭活疫苗的评价 经上述系列试验评价，证实了 Pm-HG的强毒力、高免疫原性；三株 B型P.multocida强毒株中Pm-C45的毒力最强、免疫原性最好，确定Pm-C45作为A、B型P.multocida二价灭活疫苗的B型P.multocida制苗株。更换油乳佐剂研制Pm-C45灭活苗、Pm-HG灭活苗以及二价灭活疫苗并进行评价。取45只SPF小鼠分为4个试验组颈背部免疫接种上述3种灭活苗，一免后间隔两周二免，第4试验组为不免疫对照组，每个试验组再分为2个攻毒组（5只/组），分别腹腔感染Pm-C45、Pm-HG，另设一组为空白组。间接ELISA监测小鼠抗体水平，记录攻毒后两周小鼠死亡情况并进行病理学分析。结果显示，二价灭活疫苗可诱导小鼠产生对Pm-HG和Pm-C45抗原的最高血清抗体效价分别为1：25600、1：12800；二价苗对Pm-HG、Pm-C45菌株攻毒的保护率分别为80%、100%；免疫后小鼠相比未免疫小鼠表现更大的增重、较轻的病理损伤以及更高的生存率。 通过牛A型及B型P.multocida毒力评价、A型及B型P.multocida单价苗的免疫原性评价，成功筛选出Pm-C45为牛A、B型P.multocida二价灭活疫苗候选菌株。经牛A、B型P.multocida二价灭活疫苗的评价，证明A、B型二价灭活苗较单价苗及未免疫对照组，能提供更好的双重保护力，以抵抗牛A、B型P.multocida的攻毒。该二价苗有望成为高效防控A、B型牛巴氏杆菌病的新型疫苗。