牡蛎疱疹病毒(OsHV-1),是一种双链DNA病毒,可以感染多种双壳贝类,对贝类幼虫及稚贝的致死率极高,达90%以上,是软体动物最重要的病原体之一,在世界范围内广泛流行。哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)是一种革兰氏阴性菌,菌体呈弧状,极生单鞭毛,它是发光性弧菌病的主要病原,并且能够感染多种野生与养殖的海水鱼类和无脊椎动物,一直是制约我国贝类养殖健康发展的主要传染源之一。毛蚶(Scapharcasubcrenata)是我国重要的经济贝类之一,在我国莱州湾、渤海湾、辽东湾和海州湾的浅海地区特别丰富。流行病学调查发现,毛蚶等贝类同时携带牡蛎疱疹病毒和弧菌,生长迟缓,死亡率高,其发病机制可能与太平洋牡蛎综合征相似,即疱疹病毒为原发性感染,病毒复制导致宿主的免疫抑制状态,进而导致条件性病原菌弧菌的继发感染。基于此,本研究开展了牡蛎疱疹病毒与哈维氏弧菌共感染毛蚶的研究。本研究参照山东省地方标准(DB37/T3673-2019),调查了2019-2020年度山东省各沿海地区主要养殖经济贝类及野生经济贝类牡蛎疱疹病毒的携带情况,试图明晰2019-2020年山东省主要经济贝类牡蛎疱疹病毒病爆发的流行病学规律。2019年度共在山东主要养殖区采集460份样品,2020年在山东沿海不同地区采集了459份样品,调查结果显示:2019年度牡蛎疱疹病毒阳性样品82份,总体阳性率为17.83%,主要养殖经济贝类的OsHV-1的阳性检出率为12.32%,野生经济贝类的OsHV-1的阳性检出率为26.7%,检出率大于养殖经济贝类;2020年度牡蛎疱疹病毒阳性样品79份,总体阳性检出率为17.2%,主要养殖经济贝类的OsHV-1的阳性检出率为16.85%,野生经济贝类OsHV-1的阳性检出率为17.78%,阳性检出率存在地域性,不同品种的检出率也存在差异性。本研究通过OsHV-1和哈维氏弧菌的共感染毛蚶试验,探究其对毛蚶的致病性及病毒和细菌载量的影响。结果显示,毛蚶同时感染OsHV-1和哈维氏弧菌后,总死亡率为38%,高于细菌和病毒的单独感染;采用细菌分离培养法检测肝胰腺和鳃组织的细菌载量,共感染组在24h和72h时高于哈维氏弧菌的单独感染,且肝胰腺组织的细菌载量高于鳃组织;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测了毛蚶在共感染和OsHV-1单独感染后各组织病毒的分布与载量,结果表明:各组织均含有OsHV-1,其中共感染组毛蚶的各组织一般在72h时病毒含量达到最高,为2.4×10~4cp/mg左右,病毒组毛蚶外套膜的病毒含量于攻毒24h时首先达到最高,为1.3×10~4cp/mg,斧足、鳃和肝胰腺组织在48h和84h时达到最高,分别为4.5×10~4、2.8×10~4和5.3×10~3cp/mg,之后病毒拷贝数趋近。在观察期内,各组织的病毒含量均是先升高后降低,而后归于平稳。为鉴定毛蚶抗感染的关键基因,在共感染和单独感染毛蚶后,完成了12个毛蚶血液样品的转录组测序与分析,采用DESeq2软件进行组间差异表达分析,获得两组间比较的差异基因集。和对照组相比,弧菌组差异表达基因最多,共感染组上调基因最多,这可能说明共感染可以激活毛蚶更多的反应,而弧菌可能主要参与疾病的发展。通过后续的GO富集和KEGG通路分析,发现细胞凋亡和癌症转录失调通路在三个组中都有明显差异表达,这两个通路可能是毛蚶抵抗病原体感染的关键途径,同时筛选出部分在免疫功能中扮演重要角色的差异表达基因,包括C型凝集素和热休克蛋白。综上所述,本研究对2019和2020年山东省贝类牡蛎疱疹病毒病进行了流行病学调查,掌握了牡蛎疱疹病毒病的流行情况,为预防和控制牡蛎疱疹病毒病的传播提供依据;通过牡蛎疱疹病毒和哈维氏弧菌共感染毛蚶的试验,发现牡蛎疱疹病毒和哈维氏弧菌共感染具有协同致病作用;构建了共感染和单独感染前后毛蚶的转录组数据库,筛选了部分与免疫相关的关键基因,为研究毛蚶抗感染及毛蚶免疫应答反应提供了理论依据。