论文部分内容阅读
目的：
建立联合应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增重复区域内多态性标记物和高效液相色谱分析(high-performance liquid chromatography，DHPLC)检测腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease，CMT)的致病基因周围神经髓鞘蛋白22基因(peripheral myelin protein 22，PMP22)和髓鞘蛋白零基因(myelin protein zero，MPZ)突变的技术平台，对23个CMT家系先证者进行PMP22和MPZ基因突变筛查。
方法：
应用PCR扩增重复区域内多态性标记物检测CMT家系PMP22重复突变；应用DHPLC技术对未发现PMP22重复突变的患者进行PMP22和MPZ基因的点突变筛查；经DHPLC检测出异常的PCR扩增片段进行DNA直接测序，查询基因突变与多态数据库，明确是致病突变还是多态。
结果：
23个CMT家系先证者，有家族史者11个，散发病例12个。共检测出PMP22重复突变7例，有家族史者6例，散发者1例。应用DHPLC进行BtP22和aPZ编码区的突变检测，发现了11个异常峰形，其中，PMP224号外显子扩增产物7个异常峰形，MPZ4、5号外显子和MPZ5、6号外显子上分别发现2个异常峰形。对DHPLC筛选发现异常峰形的扩增片断进行DNA直接测序，发现7例患者PMP22基因IVS4+32(C→T)；两例患者有MPZ基因5号外显子同义突变657G→A(Gly219Gly)；一例患者有MPZ基因4号外显子同义突变511A→G(Pro1711Pro)。
结论：
建立了联合应用PCR扩增重复区域内多态性标记物和DHPLC检测CMT致病基因PAP22和MPZ突变的技术平台，首次在国内应用DHPLC技术对．PMP22和MPZ进行突变检测；PCR扩增重复区域内多态性标记物，可作为CMT1A基因诊断的一种初筛方法，MPZ基因511A-G为新发现同义突变；初步验证了DHPLC进行CMT致病基因PMP22和MPZ突变检测可靠。