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自从1984年，Srivastave等首先报道了从肿瘤细胞和被病毒感染细胞中纯化的HSPs制剂具有激发保护性的抗肿瘤和抗病毒的细胞免疫反应以来，随着研究的深入，从肿瘤细胞纯化的HSP／肽复合物疫苗(grp94／肽、HSP70／肽)在多种动物肿瘤模型以及某些肿瘤的临床治疗中显示出明显的抗肿瘤效应，展示了广泛的应用前景。HSPs／肽复合物疫苗有可能成为众多肿瘤免疫治疗方法以及肿瘤综合治疗方法中可行的选择之一。 本实验研究在对骨科几种常见恶性肿瘤热休克蛋白表达的免疫组化观察的基础上，建立了稳定的S180肉瘤动物模型，对HSPs／肽复合物疫苗的分离、纯化方法进行了部分改良，用分子筛法获得HSP60、HSP70、grp94的混合提取物，用亲和层析法分别获得HSP70、HSP60，为HSPs／肽复合物疫苗的临床应用建立适用的技术平台。同时观察了不同种类、不同剂量范围的HSPs／肽复合物对小鼠S180移植性肉瘤模型免疫防治效果，初步探讨了HSPs／肽复合物激活抗肿瘤免疫的作用机理。结果表明：1．对33例骨科几种常见恶性肿瘤(骨肉瘤、软骨肉瘤、滑膜肉瘤、脂肪肉瘤、尤文氏肉瘤等)的观察表明，HSP60、grp96有高强度的表达，HSP90中等强度表达，HSP70中—低强度表达；2．在预防性免疫治疗组，混合HSPs／肽复合物蛋白组(含有HSP60、70、GP94)和纯化HSP70／肽蛋白组均有明显的主动免疫治疗预防效果，可以明显降低成瘤率及抑制肿瘤生长速度、延长小鼠生存时间；部分小鼠甚至可以观察到对生长瘤体的免疫排斥过程，达到完全无瘤健康长期生存。混合HSPs／肽疫苗组优于纯化HSP70／肽疫苗组，其有效剂量范围为2-30ug／次，以混合HSPs／肽20ug组效果最好。3．免疫治疗组对荷瘤小鼠(pre-existed tumors)用混合HSPs／肽疫苗20ug／次治疗同样有明显的肿瘤生长抑制作用，抑瘤生长率达71％，2／10肿瘤完全消退。4．初步对提取的HSP60蛋白免疫治疗效果进行了动物实军医进修学院博士学位论文摘要验观察，同样有良好的肿瘤抑制作用。抑瘤生长率达73%，1/5肿瘤完全消退。5.活存鼠脾致敏T淋巴细胞在体外对5180肉瘤及小鼠肝癌细胞有杀伤作用。前者杀伤率高于后者。 通过本实验，可以得到以下结论:1.我们所建立的HSPS/肤复合物疫苗分离、纯化的技术平台具有快速、实用、有效、经济的特点，蛋白得率(每克肿瘤湿重)分别为:混合HSPs/肤疫苗20一25mg，HsP70/肤疫苗100一150ug，HSp6o/肤疫苗400一sooug。采用只经过简单纯化后的含有HsP6o、70、GP94的混合HSPs/肤复合物蛋白进行免疫治疗，具有缩短纯化时间、减少对蛋白以及携带抗原多肤的破坏等优点，而且其免疫治疗效果优于纯化的HSP7O/肤疫苗。2.分别应用HSP70/月太、HSP60、混合HSPS/肤在小鼠移植性5180肉瘤模型中有良好的免疫防治效果。3.混合HSPs/肤疫苗免疫小鼠的脾T淋巴细胞在体外可因HSPS/肤的刺激扩增、激活，并杀伤肿瘤细胞。表现出特异和非特异性杀伤作用。这种混合HSP/肤疫苗的制备及其免疫治疗效果在国内外尚未见报道，可望在临床有广泛的应用前景。