【摘 要】
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目的:本次研究通过建立急性百草枯暴露的大鼠模型,观察分析不同百草枯暴露剂量及暴露后不同时间对大鼠脑黑质部位小胶质细胞表型分化的影响。方法:选择36只SPF级健康雌性Wistar大鼠,按体重编号,随机分为3组:对照（生理盐水）组、25mg/kg百草枯暴露组和45mg/kg百草枯暴露组,每组12只。采用一次性经口灌胃方式染毒。每组再随机分为3个亚组,分别于暴露后第18天、39天及69天,进行相关实验。
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目的:本次研究通过建立急性百草枯暴露的大鼠模型,观察分析不同百草枯暴露剂量及暴露后不同时间对大鼠脑黑质部位小胶质细胞表型分化的影响。方法:选择36只SPF级健康雌性Wistar大鼠,按体重编号,随机分为3组:对照（生理盐水）组、25mg/kg百草枯暴露组和45mg/kg百草枯暴露组,每组12只。采用一次性经口灌胃方式染毒。每组再随机分为3个亚组,分别于暴露后第18天、39天及69天,进行相关实验。通过H&E染色方法,观察急性百草枯暴露后,大鼠黑质部位神经元的病理改变;通过免疫组织化学染色方法,以Iba-1标记小胶质细胞,分析大鼠黑质部位小胶质细胞数量及形态学改变;通过双重免疫荧光标记法,以i NOS/Iba-1标记M1型小胶质细胞,Arg-1/Iba-1标记M2型小胶质细胞,分析急性百草枯暴露对大鼠黑质部位小胶质细胞分化表型的影响;采用Western blot法检测Iba-1、i NOS、Arg-1蛋白的表达水平;采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析,双侧检验水准α=0.05;采用Graphpad 7.0软件绘制图表。结果:1.急性百草枯暴露后,各暴露组大鼠体重均呈现下降趋势,至暴露后第5天,各组大鼠体重逐渐恢复,并平稳上升（P>0.05）。2.H&E染色结果显示,急性百草枯暴露后第18天时,大鼠脑黑质部位神经元排列松散,可见神经元出现核固缩、水肿、凋亡。3.免疫组织化学染色法及Western blot结果显示,在急性百草枯暴露后第18天时,随暴露剂量增加,Iba-1阳性细胞数目呈现升高趋势,组间差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,25mg/kg百草枯暴露组Iba-1阳性细胞分枝长度缩短,差异有统计学意义（P<0.05）;总体而言,随暴露剂量增加,Iba-1阳性细胞分枝数目及分枝长度均呈现降低趋势,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。4.免疫组织化学法及Western blot结果显示,在急性百草枯暴露后第39天时,与对照组比较,25mg/kg百草枯暴露组Iba-1阳性细胞数目减少,而45mg/kg百草枯暴露组增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,25mg/kg百草枯暴露组Iba-1阳性细胞分枝数目减少,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,25mg/kg百草枯暴露组及45mg/kg百草枯暴露组Iba-1阳性细胞分枝长度缩短,差异有统计学意义（P<0.05）。5.免疫组织化学染色法及Western blot结果显示,在急性百草枯暴露后第69天时,与对照组比较,45mg/kg百草枯暴露组Iba-1阳性细胞数目增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组及45mg/kg百草枯暴露组比较,25mg/kg百草枯暴露组Iba-1阳性细胞分枝数目及长度均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。6.双重免疫荧光标记法及Western blot结果显示,在急性百草枯暴露后第18天时,与对照组比较,25mg/kg百草枯暴露组大鼠黑质部位i NOS表达量升高;与对照组比较,45mg/kg百草枯暴露组大鼠黑质部位Arg-1表达量升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。7.双重免疫荧光标记法及Western blot结果显示,在急性百草枯暴露后第39天时,45mg/kg百草枯暴露组大鼠黑质部位i NOS表达量高于25mg/kg百草枯暴露组;与对照组比较,25mg/kg百草枯暴露组大鼠黑质部位Arg-1表达量升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。8.双重免疫荧光标记法及Western blot结果显示,在急性百草枯暴露后第69天时,大鼠黑质部位i NOS和Arg-1表达量均随暴露剂量增加而升高,各组间差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:1.急性百草枯暴露可对大鼠黑质部位神经元造成损伤。2.急性百草枯暴露能够异常激活大鼠黑质部位小胶质细胞。3.急性百草枯暴露后,大鼠黑质部位小胶质细胞表型分化与暴露剂量和暴露后时间有关。
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