【摘 要】
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目的:分析CREB(cAMP-response element binding protein,CREB)基因是否参与胶质瘤U251细胞系多药耐药的形成及可能存在的机制,寻求找到一个全新的能够有效逆转胶质瘤细胞多药
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目的:分析CREB(cAMP-response element binding protein,CREB)基因是否参与胶质瘤U251细胞系多药耐药的形成及可能存在的机制,寻求找到一个全新的能够有效逆转胶质瘤细胞多药耐药的分子靶点。方法:免疫组化法检测并比较不同级别脑胶质瘤组织中CREB表达水平差异。培养稳定的胶质瘤U251耐药细胞系U251/TR,CCK-8法检测细胞耐药指数,特异性敲除耐药株中的CREB基因,流式细胞分析术(FCM)检测替莫唑胺(TMZ)作用下U251细胞系及U251/TR的细胞凋亡。Crispr/cas9特异性敲除U251/TR的CREB基因,获得U251/RC细胞株。Western及rt-PCR测定敲除基因前后ABCG2、MGMT、MRP及P-gp基因表达水平。结果:本研究采用分步诱导法成功从U251细胞系中培养出稳定的耐药细胞系U251/TR。在TMZ初始诱导剂量5μmol/L,终末剂量400μmol/L的DMEM培养基中,U251的IC50为(41.36±1.61)μmo L/L,U251/TR的IC50为(293.09±2.46)μmo L/L,U251/TR是U251的7倍。采用Crispr/cas9特异性敲除U251/TR的CREB基因获得U251/RC细胞系,在TMZ干预剂量100μmol/L的培养基中,U251/TRC的细胞凋亡水平远高于U251/TR。Western及rt-PCR测定结果显示,U251/RC的ABCG2、MGMT、MRP及P-gp表达水平均明显降低。结论:CREB基因通过调控下游ABCG2、MGMT、MRP及P-gp的表达水平参与药物转运体、药物靶点、细胞凋亡、细胞修复等过程,影响细胞多药耐药的产生与逆转。这为从根本上解决目前临床胶质瘤治愈及术后复发的双重问题提供了新的方向。
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