【摘 要】
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利用基因编辑技术可以实现多基因调控并培育转基因动物新品种。本研究利用CRISPR/Cas9技术,将肌肉特异性双向共表达打靶载体5arm-shRNA-MRF 4-MRF4-hFAD3-3arm(MSTN siRNA-hF
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利用基因编辑技术可以实现多基因调控并培育转基因动物新品种。本研究利用CRISPR/Cas9技术,将肌肉特异性双向共表达打靶载体5arm-shRNA-MRF 4-MRF4-hFAD3-3arm(MSTN siRNA-hFAD3)定点整合入已证明的安全整合位点NCAPG-LCORL位点。研究MSTN siRNA-hFAD3表达对肌肉和脂肪酸相关基因的表达及n3多不饱和脂肪酸含量的影响,以期达到既促进肌肉发育,同时增加肌肉中n-3多不饱和脂肪酸,有效改善肉质、提高肉量的目的。结果表明：(1)CRISPR/Cas9成功介导MSTN siRNA-hFAD3肌肉特异性双向共表达载体在NCAPG-LCORL位点定点整合入牛细胞基因组。(2)MSTN siRNA-hFAD3基因的表达在细胞水平显示一定的肌肉特异性。(3)在定点整合的牛胎儿成纤维细胞及肌肉卫星细胞中,脂肪相关基因的表达结果显示,脂肪合成与脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移动；肌肉发育相关基因表达量均上调；n6/n3比值均下降。(4)成功获得了6株同源重组阳性单克隆细胞株,并通过体细胞克隆制备转基因克隆胚胎。综上所述,肌肉特异性MSTN siRNA-hFAD3在转基因细胞中表达良好,可进一步用于转基因克隆牛的生产。
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