目的:前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一,并且有着较高的发病率。前列腺癌多见于老年患者,由于老年人各种因素共同作用,使得其罹患前列腺癌后手术有一定难度,术后并发症较多,预后也较差,所以对于老年患者的康复有着一定的威胁。可见对于前列腺癌而言,积极的寻求一种或多种有效治疗前列腺癌的药物及方法有着重要的意义。目前关于癌症的治疗,多数是通过药物诱导癌细胞凋亡从而进一步抗肿瘤,然而,细胞衰老在抗肿瘤的研究中备受关注,其作为一种能够通过抑制细胞増殖从而起到抗肿瘤的作用。在我国,天然化合物作为一种重要的药物来源,不仅不良反应小,价格低廉,而且不易产生耐药性,具有其独特的抗肿瘤优势,因而具有良好的发展前景,目前已成为医药领域研究的热点。蛇床子素(Osthole)是天然的香豆素类化合物,提取于中药蛇床子,其具有多种药理作用,比如抗炎、止痒、抗哮喘、抗氧化、抗骨质疏松、免疫调节、促进骨折愈合、抗菌抗病毒及抗肿瘤等等。据报道,蛇床子素可以诱导多种癌细胞发生调亡进而达到抗肿瘤的作用。然而,关于蛇床子素诱导前列腺癌细胞的研究尚不多,尤其是有关诱导前列腺癌细胞发生衰老的相关研究极少,本研究通过体外细胞实验研究蛇床子素对前列腺癌LNCap细胞衰老的影响及其作用机制,以期为蛇床子素新药开发及临床治疗提供一定的参考依据。研究方法:本实验选取对数生长期细胞进行实验,采用CCK8的实验方法,将浓度分别为(0、12.5、25、50、100、150umol/L)的蛇床子素作用于前列腺癌LNCap细胞24、48、72小时后,对其细胞活力的影响进行检测,并计算出细胞在不同时间点所对应的(Half-inhibitory concentration 50)IC50值。采用EdU检测法检测不同浓度蛇床子素作用24小时后LNCaP细胞的增殖情况,并进一步采用流式细胞仪检测经不同浓度药物作用后细胞周期阻滞于情况。采用β-半乳糖苷酶染色法检测不同浓度蛇床子素作用于前列腺癌LNCap细胞24小时后细胞衰老的情况,经染色后将细胞置于光倒置显微镜下进行拍照,并进一步观察并对比衰老细胞与正常细胞的形态差异。采用Western Blot法检测,前列腺癌LNCap细胞经过不同浓度的蛇床子素持续作用24小时后,细胞周期相关蛋白Skp2、P27表达情况。结果:1.蛇床子素通过使细胞生长周期阻滞于G2/M期而抑制前列腺癌细胞的生长与增殖,CCK8检测结果显示,经过不同浓度蛇床子素分别作用于前列腺癌LNCaP细胞24、48、72小时后,蛇床子素可以抑制LNCaP细胞的增殖,并且呈现一定的时间依赖性和浓度依赖性。EdU实验结果显示,蛇床子素可以明显抑制LNCaP细胞的増殖,同时细胞周期检测结果示,LNCaP细胞在药物作用24小时后可使得细胞周期都阻滞于G2/M期。2.蛇床子素可以诱导前列腺癌细胞发生衰老,蛇床子素作用于前列腺癌LNCaP细胞24小时后,β-半乳糖苷酶染色法显示阳性染色细胞数有所增多,表示其可以诱导前列腺癌LNCaP细胞发生衰老样改变,同时可以发现随着药物浓度的增加,衰老的细胞数也有所增加,呈现一定的浓度相关性。3.蛇床子素可以使得前列腺癌细胞中衰老相关蛋白发生变化,Western Blot法检测周期相关蛋白Skp2、P27的表达:随着给药浓度的增加,周期相关蛋白P27的表达逐渐增加,Skp2的表达逐渐减少,差异有统计学意义。结论:1.蛇床子素不仅可以降低人前列腺癌LNCaP细胞活力,使得其细胞周期阻滞于G2/M期,进而达到抑制其细胞的增殖,并呈现一定时间依赖性和浓度依赖性;2.蛇床子素可以诱导人前列腺癌LNCap细胞发生衰老样改变,并呈现一定浓度依赖性;3.蛇床子素可以通过调节衰老相关蛋白的表达从而使得前列腺癌LNCaP细胞发生衰老,包括下调周期相关蛋白Skp2的表达以及上调蛋白P27的表达。