异基因骨髓细胞联合淋巴细胞输注抑制结肠癌肝转移的研究

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目的:  以小鼠为研究模型,将allo-HSCT(Allo-HSCT)用于病程相对较早期的结肠癌肝转移的防治上。通过建立小鼠结肠癌肝转移模型后,静脉输注半相合来源骨髓细胞和淋巴细胞,之后接受环磷酰胺非清髓性处理,再输注供体淋巴细胞,首先明确异基因骨髓细胞联合淋巴细胞输注时机与抗结肠癌肝转移效应间的关系;而后探讨Al lo-HSCT对结肠癌肝转移的抑制作用及其对嵌合体和移植物抗宿主病(GVHD)的影响,并对其抑瘤机制进行研究,为结直肠癌肝转移防治的免疫治疗提供新方法。  方法:  以C57BL/6(H-2Kb)小鼠为骨髓细胞、淋巴细胞供鼠,BALB/c×C57BL/6杂交一代CB6F1小鼠(H-2Kd/b)为受鼠,受鼠通过经脾注射BALB/c小鼠来源CT-26结肠癌细胞建立肝转移模型。根据荷瘤后不同时间段进行骨髓细胞+脾细胞尾静脉输注,将实验分为四组,观察各组小鼠GVHD临床表现、肿瘤肝转移情况及生存时间。BAL B/c×C57BL/6杂交一代CB6F1小鼠经脾注射CT26结肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型,随机分为四组,取自C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠骨髓及淋巴细胞混合后根据前实验所得最佳荷瘤后输注时间行尾静脉注射,观察移植后的小鼠生存情况、肿瘤肝转移状况,GVHD的情况;流式细胞仪作嵌合体的分析,ELISA方法测定血浆IL-2、INF-γ、IL-4、TGF-β蛋白水平。  结果:  1、荷瘤后第3天进行骨髓细胞+脾细胞尾静脉输注较对照组、7天组、14天组生存时间明显延长,肿瘤抑制率明显增加,但GVHD评分与其他各组无明显差异。2、静脉输注半相合来源骨髓细胞和淋巴细胞,之后接受环磷酰胺非清髓性处理,再输注供体淋巴细胞的小鼠结肠癌肝转移抑制率较其他组明显增高,且抑瘤率明显增加,生存期明显延长,与环磷酰胺组及输注全相合来源骨髓细胞和淋巴细胞相比,差异具有统计学意义。移植7d后,供鼠细胞嵌合率逐渐增加;至移植后28d,供鼠细胞基本取代受鼠细胞,嵌合率达99%以上,同时,实验小鼠的移植物抗肿瘤效应明显增强,但未出现严重的GVHD症状,且小鼠血浆IL-2、INF-γ蛋白水平较其他组明显升高,而IL-4蛋白水平无明显差异,TGF-β蛋白水平降低。  结论:  在受鼠建立肝转移模型后第三天进行骨髓细胞+脾细胞尾静脉输注可以在无明显GVHD症状的前提下实现较高的肿瘤抑制率,同时获得较长的生存时间,小鼠经环磷酰胺非淸髓处理的异基因骨髓细胞联合淋巴细胞移植后28天嵌合率明显增加,伴随产生了明显的移植物抗肿瘤效应,其对结肠癌肝转移具有抑制作用。而血浆IL-2、INF-γ、IL-4、TGF-β蛋白水平变化是与肿瘤生长抑制直接相关的。
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