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目的:探索HMGA1对人乳腺癌MCF7细胞糖酵解代谢途径的影响,初步明确HMGA1基因在乳腺癌糖代谢过程中的作用及分子机制。方法:1.培养普通MCF7细胞株,使用脂质体转染法分别将HMGA1质粒及空质粒转入MCF7细胞中,并使用500ug/ml浓度的G418(遗传霉素)筛选出稳定转染株。通过WB技术检测转染效果,MTT法及细胞克隆形成实验检测HMGA1稳定转入人乳腺癌MCF7细胞后对细胞增殖能力的影响。2.通过检测比较HMGA1稳定高表达后与空质粒对照组中MCF-7细胞的葡萄糖消耗量、乳酸累积量和ATP生成量之间的差异来初步了解HMGA1对MCF7细胞的葡萄糖代谢途径的作用。3.使用蛋白质免疫印迹法,从蛋白质的表达水平来分析MCF-7细胞中HMGA1对细胞糖酵解途径中关键酶的影响。4.进一步通过对糖酵解关键酶PFK、HK、PK、LDH等活性进行测定,初步探讨HMGA1在糖酵解代谢途径中可能调控的下游靶点及机制。结果:1.MTT实验及细胞克隆形成实验均表明:HMGA1稳定转染人乳腺癌MCF7细胞后,对细胞增殖能力有促进作用(P<0.05)。2.HMGA1转染人乳腺癌MCF7细胞后,与pc DNA3.1组细胞(空质粒组)相比,检测结果表明HMGA1高表达组细胞的葡萄糖消耗量、乳酸累积量、ATP生成量明显增高,且均具有统计学意义(P<0.05)。3.HMGA1高表达组细胞内有关糖酵解反应的关键酶:HK2、PKM2、PFKP、LDHA表达均明显增加,而PDH的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05),HK1、PKM1/2、PFKL、GLUT1的表达未见明显差异,无统计学意义(P>0.05)。4.HMGA1高表达组细胞中FPK、PK的酶活性高于转染空质粒组MCF7细胞,且差异有统计学意义(P<0.05),而HK、LDH酶活性高于转染空质粒组MCF7细胞则更加明显(P<0.01)。结论:1.HMGA1可促进MCF7细胞增殖和克隆形成。2.HMGA1转染人乳腺癌MCF7细胞后能够促进其糖酵解过程。