【摘 要】
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目的:通过建立检测HLA-A、-B非多态位点表达的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,并结合CD4/CD8比值和免疫抑制剂(FK506)血药浓度,研究外周血淋巴细胞(PBL)HLA-I作为移植后免
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目的:通过建立检测HLA-A、-B非多态位点表达的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,并结合CD4/CD8比值和免疫抑制剂(FK506)血药浓度,研究外周血淋巴细胞(PBL)HLA-I作为移植后免疫状态,尤其是早期排异反应评估指标的可行性。 方法:依据GenBank中人HLA-I cDNA序列,根据HLA-A基因外显子4、5中的保守序列自主设计、筛选引物,采用RT-PCR一步法扩增HLA-A mRNA。收集30例肾移植患者术前及术后3个月内的抗凝外周血(随访10例),并设立正常对照61例,提取外周血淋巴细胞,RT-PCR扩增HLA-A mRNA,琼脂糖凝胶电泳结果采用Bandscan软件分析相对灰度值,半定量HLA-A的基因表达。同时参照文献合成HLA-B特异性引物,随机选择5例随访病人与20例正常对照,RT-PCR扩增HLA-B mRNA,以观察HLA-A与HLA-B测定符合率。并采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)连续监测术后CD4/CD8比值及FK506 血药浓度。 结果: 1.肾移植患者HLA-A mRNA阳性表达率为29%(20/70),较正常对照表达(82%,50/61)明显降低(P<0.001)。10例连续监测患者中有2例在监测期间发生急性排斥反应,排斥期间患者的HLA-A表达升高。不同患者移植后同一时期HLA-A表达存在个体差异,与有无感染、排斥反应有关。 2.HLA-B mRNA在随访病例中表达明显低于正常对组(P<0.05)。与相应的HLA-A表达比较,二者具有一致性(P>0.05)。 3.随访移植患者的外周血T淋巴细胞亚群与正常对照间的差异具有显著性
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