论文部分内容阅读
目的:1.妊娠第8-13天对孕鼠进行热暴露,探索孕中期热暴露对子代宫内发育、HSP70表达及胎盘细胞凋亡的影响。2.构建SD大鼠HSP70过表达及干扰表达腺病毒载体,检测其在SD孕鼠体内诱导或干扰循环及胎盘组织HSP70表达的效果。3.人为诱导或干扰孕鼠HSP70的表达,然后将其进行孕中期热暴露,探讨HSP70表达对热暴露胚胎的影响及参与机制。4.高温与子宫血流灌注不足都是FGR的重要发病因素,通过观察比较孕中期热暴露、子宫缺血及热暴露后子宫缺血对胚胎和胎盘发育的影响,以及胎盘与循环HSP70的变化,探讨孕中期热暴露在FGR病因学中的影响机制。方法:1.将24只SD孕鼠随机分为2组。对照组:孕期全程在(23±1℃)的环境中饲养;热暴露组:孕早期在(23±1℃)的环境中饲养,妊娠第8天至第13天进行热暴露,热暴露结束后回归(23±1℃)的环境中饲养,在妊娠第1、8、14、21天测量并记录孕鼠的体重。在妊娠第21天,两组所有孕鼠用0.3%戊巴比妥麻醉后行剖腹取胎,并从腹主动脉采血3ml。测量存活胎鼠的数量、体重、性别、身长、尾长、有无畸形、胎盘重量及死胎数,采用Western blotting检测胎盘HSF70、Bax、Bc L-2的表达及ELISA检测血浆HSP70水平。2.将12只SD孕鼠随机分为3组。在妊娠第8天,对照组孕鼠尾静脉注射空载腺病毒穿梭质粒,过表达组注射HSP70重组腺病毒表达载体,干扰表达组注射HSP70重组腺病毒干扰载体,各组病毒感染剂量均为2.5×109 PFU/kg。然后将三组孕鼠放置于温度(35±1?C)的环境中进行热暴露,感染病毒4天后处死孕鼠,采用Western blotting检测胎盘组织HSP70蛋白表达和ELISA检测孕鼠血浆HSP70水平以验证过表达或干扰表达HSP70腺病毒载体的效果。3.将30只SD孕鼠随机分为3组。在妊娠第8天,对照组尾静脉注射空载腺病毒穿梭质粒,过表达组注射HSP70重组腺病毒表达载体,干扰表达组注射HSP70重组腺病毒干扰载体,各组病毒感染剂量均为2.5×109PFU/kg。然后进行热暴露,妊娠第14天回归(23±1?C)的环境中饲养,妊娠第21天三组孕鼠用0.3%戊巴比妥麻醉后行剖腹取胎,并从腹主动脉采血3ml。测量存活胎鼠的数量、体重、性别、身长、尾长、有无畸形、胎盘重量及死胎数,采用Western blotting检测胎盘HSF70、Bax、Bc L-2的表达及ELISA法检测血浆HSP70水平。分析胎鼠发育与胎盘、血浆HSP70表达的变化关系。4.将36只SD孕鼠随机分为3组。热暴露组(Ⅰ组):孕早期在(23±1℃)的环境中饲养,妊娠第8天至第13天进行热暴露,然后回归(23±1℃)的环境中饲养;子宫缺血组(Ⅱ组):孕期全程在(23±1℃)的环境中饲养,妊娠第14天行双侧子宫动静脉部分结扎;热暴露后子宫缺血组(Ⅲ组):孕早期在(23±1℃)的环境中饲养,妊娠第8天至妊娠第13天进行热暴露,然后行双侧子宫动静脉部分结扎后回归(23±1℃)的环境中饲养。在妊娠第21天行剖腹取胎,并从腹主动脉采血3ml。测量存活胎鼠的数量、体重、性别、身长、尾长、有无畸形、胎盘重量及死胎数,采用Western blotting检测胎盘HSF70、Bax、Bc L-2的表达及ELISA法检测血浆HSP70水平。分析胎鼠发育与胎盘、血浆HSP70表达的变化关系。结果:1.研究一结果:热暴露组孕鼠妊娠第21天体重及孕期体重增加值均小于对照组,且差异均有统计学意义(均P<0.05);热暴露组胎鼠的体重、身长、尾长均小于对照组,且差异均有统计学意义(均P<0.05);热暴露组的胎鼠出生性别比高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);热暴露组的HSP70表达及Bax/Bcl-2比值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);热暴露组孕鼠血浆HSP70的水平高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。2.腺病毒载体效果验证结果:HSP70过表达载体组的循环HSP70水平高于对照组和干扰表达载体组,且差异均有统计学意义(P<0.05),干扰HSP70表达组的血浆HSP70水平低于对照组,差异也有统计学意义(P<0.05);HSP70过表达载体组的胎盘HSP70的表达高于对照组和干扰表达载体组,且差异均有统计学意义(P<0.05),干扰表达载体组的胎盘HSP70表达低于对照组,差异也有统计学意义(P<0.05)。3.研究二结果:HSP70过表达组的胎死率低于对照组和干扰表达组,且差异均有统计学意义(P<0.05),干扰表达组与对照组胎死率的比较差异无统计学意义(P>0.05);过表达组子代性别比最高,干扰表达组的性别比最低,且三组孕鼠子代出生性别比的比较差异均有统计学意义(均P<0.05);HSP70过表达组的胎盘重量高于对照组与干扰表达组,且差异均有统计学意义(均P<0.05);干扰表达组的胎盘重量低于对照组,差异同样有统计学意义(P<0.05);三组胎盘组织HSP70表达的水平为:过表达组最高,对照组次之,干扰表达组最低,且它们组间比较的差异均有统计学意义(均P<0.05);三组胎盘组织Bax与Bcl-2的比值(Bax/Bcl-2)为干扰表达组最高,对照组次之,过表达组最低,且它们组间比较的差异均有统计学意义(均P<0.05);过表达组孕鼠血浆HSP70水平低于对照组和干扰表达组,且比较差异均有统计学意义(均P<0.05),但干扰表达组孕鼠血浆HSP70水平与对照组的比较差异无统计学意义(P>0.05)。4.研究三结果:热暴露后子宫缺血组孕鼠妊娠第21天体重及孕期体重增加值均低于其余两组,且比较差异均有统计学意义(均P<0.05),热暴露组和子宫缺血组孕鼠妊娠第21天体重及孕期体重增加值的比较差异均无统计学意义(P>0.05);热暴露后子宫缺血组的胎死率高于其余两组(均P<0.05);热暴露后子宫缺血组的胎盘重量低于其余两组,且差异均有统计学意义(均P<0.05);三组胎盘组织HSP70表达水平的组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05);三组胎盘组织Bax与Bcl-2的比值(Bax/Bcl-2)为热暴露后子宫缺血组最高,子宫缺血组次之,热暴露组最低,且它们组间比较的差异均有统计学意义(均P<0.05)。热暴露组和子宫缺血组孕鼠血浆HSP70水平无显著差异(P>0.05),但热暴露后子宫缺血组血浆HSP70水平高于其余两组,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:1.孕中期(35±1℃)热暴露会给孕鼠子代的宫内生长发育带来不利影响。2.p AD-CMV-HSP70重组腺病毒表达载体与U6-sh RNA-loop-anti-sh RNAteminator-UBC-e GFP-HSP70重组腺病毒干扰载体用于提高或干扰孕鼠循环及胎盘HSP70的表达是可行的。3.诱导孕中期热暴露孕鼠HSP70高表达可以有助于胎盘的发育,降低胎死率;干扰孕中期热暴露孕鼠HSP70表达则会影响胎盘的生长发育。4.胎盘HSP70表达水平与子代胎死率密切相关,推测胎盘HSP70高表达具有促进胎盘生长及提高胚胎存活率的作用。5.孕中期热暴露后子宫缺血会严重影响胎盘及胚胎的宫内发育。与细胞内HSP70不同,母体循环中HSP70水平的升高会给胚胎的发育带来不利影响。