目的:优化鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,C.psittaci,Cps)临床株分离培养技术,建立C.psittaci感染小鼠的动物模型,为C.psittaci流行病学调查、临床诊断及致病性和致病机制研究奠定基础。初步探讨IFN-γ对C.psittaci A血清型菌株的抗感染作用,为进一步阐明机体抗衣原体免疫机制提供参考数据。方法:通过分子生物学技术,提取禽鸟肝肺组织DNA,PCR扩增特异性C.psittaci ompA基因,进一步酶切、测序鉴定。同时将PCR阳性标本肝组织匀浆液接种到单层敏感细胞株HeLa细胞或Vero细胞中培养,Giemsa和免疫荧光染色法鉴定衣原体包涵体。将临床株扩大培养后,用2×104、2×105、2×106 IFU三个剂量鼻饲攻击C57BL/6小鼠,分别于感染后5d和10d处死小鼠,取心、肝、脾、肺、肾进行苏木素-伊红染色(HE染色法)和免疫组织化学染色,显微镜观察受染小鼠各脏器病理变化。用不同浓度的rhIFN-γ(5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL)作用于感染C. psittaci 6BC的HeLa细胞或Vero细胞48h,计数包涵体数目,并观察包涵体形态的改变。2×106 IFU C. psittaci 6BC鼻内感染C57BL/6小鼠,于感染前、后24h内腹腔注射rmIFN-γ10μg,观察小鼠食欲情况、活动状态、生存率等一般指标的变化,于感染后5d和10d,处死小鼠,取肝、肺组织进行HE和免疫组化染色比较IFN-γ处理组与对照组的肝、肺组织的病理变化;并取感染后5d的肺组织进行培养,计数各组包涵体数目。结果:1)应用PCR、酶切及测序的方法从100只禽鸟标本中检测到6株C.psittaci菌株(6%),并成功地在HeLa及Vero细胞中培养出3株(3%)。2)比较了C.psittaci在Vero细胞与HeLa细胞培养生长情况,结果显示Vero内的衣原体包涵体积大,结构致密,对衣原体感染引起的宿主细胞溶解耐受性较HeLa强,更适合用于C.psittaci的分离培养及体外研究。3)成功建立C.psittaci的鼠呼吸道感染模型。应用2×106、2×105、2×104 IFU经呼吸道感染C57BL/6小鼠,均可引起相应的急性临床及病理变化,且呈现明显的剂量依赖性,高浓度感染组小鼠的临床表现及病理变化均较低浓度感染组严重。各剂量组小鼠感染后2天体重明显下降,分别为4.33±1.03g、2.83±1.17 g、2.67±0.82 g,而PBS对照组体重下降仅为0.17±0.75 g。感染后10天,各剂量组生存率分别为0%、33.3%、100%,PBS对照组生存率为100%。4) IFN-γ在C.psittaci感染HeLa细胞的体外实验研究显示,IFN-γ具有明显的抗C.psittaci感染作用,呈剂量依赖性。5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL rhIFN-γ处理组在C.psittaci 6BC感染48h后,包涵体数目明显低于对照组,各剂量rhIFN-γ处理组包涵体数分别为(23.8±5.1)×106,(10±3.58)×106,(8.0±2.22)×106),未处理组为(43.3±11.05)×106;且经rhIFN-γ处理的衣原体包涵体形状不规则,体积约为对照组1/4~1/5。5) C.psittaci感染的小鼠体内实验也显示,IFN-γ有明显的抗C.psittaci感染作用,可明显减轻小鼠急性临床表现及脏器病理变化,且rmIFN-γ处理组生存率明显高于未处理组,感染前、后24h内腹腔注射rmIFN-γ组及未处理组生存率分别为75%、43.75%、12.5%。结论:优化了C.psittaci临床株的分离培养技术,成功建立了C.psittaci感染小鼠的动物感染模型,并初步证明IFN-γ对宿主抗C.psittaci A血清型菌株具有明显的保护作用,且呈剂量依赖性。