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目的:研究DSS诱导的溃疡性结肠炎大鼠模型结肠组织紧密连接蛋白claudin-8及炎症因子的表达,探讨claudin-8在溃疡性结肠炎发病中的可能机制。
方法:24只健康Spmgue-Dawley大鼠随机分成两组:溃疡性结肠炎模型组(Ulcerative Colitis,UC组,n=12)和正常对照组(Normal Control,NC组,n=12),UC组大鼠自由饮用40g/LDSS溶液7d,建立急性溃疡性结肠炎模型,NC组正常饮水,UC组和NC组均正常进食,每日记录大鼠体质量、大便性状、隐性或显性出血情况。第8天确定造模成功后,麻醉处死大鼠,取结肠标本,结肠远端0.5cm组织10%甲醛溶液固定,H-E染色观察结肠粘膜病变,免疫组化观察claudin-8在结肠粘膜的表达,ELISA法测定结肠组织TNF-α、CRP表达水平。此外,对claudin-8免疫组化照片进行光密度分析,并与炎症因子表达水平和组织学损伤评分进行相关性分析,SPSS17.0统计软件统计检验。
结果:
(1)一般资料:饮用4%DSS溶液第3天大鼠毛发色泽灰暗、精神萎靡,体质量减轻,出现部分隐血阳性,于第7天全部肉眼血便。
(2)H-E染色:UC模型组病变主要累及粘膜及粘膜下层,可见大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞为主,部分表面上皮脱落,上皮内杯状细胞减少,隐窝破坏。
(3)免疫组化染色:claudin-8表达于肠粘膜上皮细胞膜和细胞间隙,UC组表达较正常对照组下降(0.1±0.007 vs0.2±0.011,P<0.01)。
(4)ELISA:结肠组织TNT-α:UC组8.51±1.55pg/mg蛋白,NC组:2.21±0.38pg/mg蛋白,P<0.01,具有显著差异;CRP:UC组161.8±35.6ng/mg蛋白,NC组50.5±5.9ng/mg蛋白,P<0.01,具有显著差异。
(5)claudin-8表达与对炎症因子和组织损伤的相关性:claudin-8表达水平与结肠组织中TNF-α和CRP浓度均显著负相关,且与组织学评分呈负相关关系。
结论:
1.实验性结肠炎模型中紧密连接蛋白claudin-8表达下降,与病理学评分相关,提示claudin-8可能与实验性结肠炎的发生发展有一定关联。
2.实验性结肠炎肠粘膜组织TNF-α水平与claudin-8表达呈负相关,提示局部炎症反应可能与claudin-8的表达下降有一定关系。