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目的:通过体外细胞培养,观察肠驱虫药氯硝柳胺(Niclosamide)对SKOV3细胞的生长抑制作用,并探讨其抑制SKOV3细胞存活的内在分子机制。方法:1、MTT法检测不同浓度氯硝柳胺对SKOV3细胞的生长抑制作用并筛选出适宜药物浓度(4umol/L和8umol/L)进行后续实验。2、MTT法检测氯硝柳胺联合临床一线化疗药物对SKOV3细胞的毒性作用。3、流式细胞术(FCM)测定氯硝柳胺及氯硝柳胺联合化疗药物对SKOV3细胞凋亡作用的影响。4、实验分为对照组、4u M Niclosamide组、8u M Niclosamide组、化疗药物组、4u M Niclosamide+化疗药物组及8u M Niclosamide+化疗药物组;RT-PCR法检测不同实验组Wnt/β-catenn信号通路中β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)m RNA表达的变化,Western blot法检测β-catenin和Cyclin D1蛋白含量的表达变化。5、统计软件分析实验数据。结果:1、MTT结果:氯硝柳胺抑制SKOV3细胞生长,且其抑制作用与药物剂量及作用时间呈正相关。统计后分析,氯硝柳胺抑制50%SKOV3细胞生长的药物浓度随氯硝柳胺作用时间延长而降低:24h的IC50浓度约为6.29u M/L,48h的IC50浓度约为3.55u M/L,72h的IC50浓度约为1.31u M/L。本实验选取4u M/L及8u M/L作为后续实验浓度。2、MTT结果:8u M/L氯硝柳胺对SKOV3细胞的抑制作用显著高于4u M/L氯硝柳胺,差异有意义(P=0.000)。氯硝柳胺联合顺铂对于SKOV3细胞的抑制作用与单用氯硝柳胺组相比,差异无明显意义(P>0.05)。3、FCM结果:氯硝柳胺联合顺铂用药组与单纯氯硝柳胺用药组分别作用于SKOV3细胞24h后肿瘤细胞的凋亡率无明显差异。4、RT-PCR及Western Blot检测结果表明:予氯硝柳胺作用24h后,Wnt/β-catenin通路中β-catenin及Cyclin D1 m RNA及蛋白质的表达水平较正常对照组降低,且氯硝柳胺药物浓度越高,β-catenin及Cyclin D1 m RNA及蛋白质的表达水平越低(P=0.000);氯硝柳胺联合一线化疗药物作用24h后检测β-catenin及Cyclin D1m RNA及翻译蛋白产物表达量,结果显示,与单用氯硝柳胺组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1、抗肠寄生虫药氯硝柳胺对SKOV3细胞具有生长抑制作用,在一定范围内与药物剂量及作用时间呈正相关。2、氯硝柳胺阻断Wnt/β-catenin通路的转导,在一定范围内其阻断作用与药物剂量相关,即药物浓度越高,其抑制作用越显著。3、氯硝柳胺促进SKOV3细胞凋亡与其抑制β-catenin及Cyclin D1基因和蛋白的表达有关。4、氯硝柳胺与一线化疗药物顺铂配伍使用无协同杀伤SKOV3细胞的作用。5、化疗药物顺铂杀伤SKOV3的作用与Wnt/β-catenin通路无明显相关性。