乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性感染是我国肝硬化和肝癌发病的主要危险因素。HBV可由其前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)经逆转录过程产生亚基因长度的剪接变异体,其中长度为2.2 kb的剪接变异体占80%以上,分为单剪接型和双剪接型,它们均存在于HBV感染者肝组织中,而且已被证明与病毒的慢性、持续性感染和肝纤维化有关。本实验室前期研究证实双剪接型2.2 kb HBV剪接变异体编码的蛋白HBDSP(Hepatitis B Doubly Spliced Protein)具有反式激活作用,可能会激活细胞原癌基因和其他乙肝病毒编码蛋白表达。但目前HBDSP在肝癌发病中的具体作用及机制仍不明确。本研究着眼于HBDSP对肝癌细胞迁移及侵袭转移能力的影响。首先,包装获得表达HBDSP重组腺病毒,感染Huh7、HepG2肝癌细胞株;通过细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭、CCK8检测等实验研究HBDSP对肝癌细胞迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响;在此基础上,检测HBDSP过表达细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物E-钙黏素(E-cadherin,E-cad)、N-钙黏素(N-cadherin,Ncad)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子(Snail)的变化,结果表明过表达HBDSP能诱导肝癌细胞发生EMT。本研究进一步以高通量测序的方法开展了HBDSP过表达肝癌细胞的转录组学研究,深入探讨HBDSP在HBV相关疾病中的具体致病机制。利用RNAseq技术对过表达HBDSP的Huh7肝癌细胞株进行转录组测序,结果发现过表达HBDSP的Huh7肝癌细胞株有224个基因上调,有266个基因下调,其中11个上调基因和4个下调基因表达有显著性差别。此外,基因功能注释分析发现差异基因主要富集在黏着连接(adherens junction)、细胞-细胞外基质黏着连接(cell-substrate adherens junction)、锚定连接(anchoring junction)、黏着斑(focal adhesion)等与肿瘤的侵袭转移相关的条目上。以上结果为后续深入研究HBDSP导致肝癌发生发展的机制奠定了基础。