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目的:
病毒性心肌炎(VMC)是一种与病毒感染有关的局限性或弥漫性炎症性心肌疾病，是最常见的感染性心肌炎。多发于儿童和青壮年。轻者症状轻微而呈亚临床型或隐匿型，重者由于病变弥漫，出现心脏扩大、心功能不全、严重心律失常、休克等，甚至猝死。其发病机制尚未完全阐明。近年来，很多研究表明，细胞凋亡也是引起病毒性心肌炎心肌细胞损伤的重要原因。本实验通过检测CVB3大鼠心肌细胞感染模型caspase-3 mRNA、颗粒酶B/PFP的表达，探讨益心康对CVB3感染心肌细胞凋亡的影响。
方法:
1、原代培养出生1-3天的SD大鼠乳鼠心肌细胞;
2、心肌细胞上测定CVB3病毒的TCID50;
3、益心康药液制备;
4、益心康药液及利巴韦林注射液对心肌细胞最大无毒剂量的测定;
5、通过SD大鼠乳鼠体外原代培养的心肌细胞，建立CVB3感染模型。实验分为四组，正常对照组:不感染病毒，不加益心康及利巴韦林;病毒对照组:感染病毒，不加益心康及利巴韦林;益心康组:感染病毒后加含益心康药液的培养液;利巴韦林组:感染病毒后加含利巴韦林的培养液。
6、检测指标
(1) ELISA法测定药物干预后48h各组心肌细胞颗粒酶B及PFP含量，比较益心康及利巴韦林对心肌细胞的保护作用。
(2) RT-PCR法测定各组心肌细胞在药物干预48h后caspase-3的含量，比较益心康及利巴韦林对CVB3感染心肌细胞凋亡的影响。
7、统计学分析
采用SPSS18.0统计软件分析，数据处理用均数±标准差表示，采用单因素方差分析比较，P＜0.05为差异有统计学意义。
实验结果:
1、ELISA法测定各组颗粒酶B及PFP的结果显示:益心康及利巴韦林干预心肌细胞后48小时后，病毒对照组细胞上清液PFP、颗粒酶B高于正常对照组(P＜0.01);益心康组及利巴韦林组细胞上清液颗粒酶B、PFP均低于病毒对照组(P＜0.01)，益心康组颗粒酶B、PFP水平低于利巴韦林组(P＜0.05);
2、RT-PCR法测定各组心肌细胞caspase-3 mRNA含量结果显示:在利巴韦林及益心康干预48小时后病毒对照组caspase-3 mRNA含量均高于正常对照组(P＜0.01);益心康组、利巴韦林组心肌细胞caspase-3 mRNA水平低于病毒对照组CP＜0.01);益心康组caspase-3mRNA水平低于利巴韦林组(P＜0.05)。
结论:
益心康能降低心肌细胞CVB3病毒感染后颗粒酶B、PFP的水平及心肌细胞caspase-3mRNA的表达，作用优于利巴韦林组。